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SDS-PAGE快速染色脱色及干胶制备方法 （转）

2007-05-22 13:07阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/1151514947

1、 SDS-PAGE凝胶电泳
表1　10%的分离胶和4%的浓缩胶配方
Tab.1 Components of 10% separation gel and 4% concentration gel
凝聚组份 10%分离胶（10mL） 4%浓缩胶（5mL）
去离子水 (mL) 3.98 3.03
分离胶缓冲液 (mL) 2.5 －
浓缩胶缓冲液 (mL) － 1.25
凝胶储备液 (mL) 3.4 0.65
10%过硫酸铵 (礚) 100 50
TEMED (礚) 20
br> 20
2、 染色液、脱色液
染色液（0.1%考马斯亮蓝R-250 (w/v)，50%乙醇(v/v)，10%冰醋酸(v/v)，用去离子水定容，然后过滤。脱色液（5%乙醇(v/v)，7%冰醋酸(v/v)）。
3、 染色、脱色
电泳完毕，剥胶后，在60篊水浴中染色30min；60篊水浴中脱色1h，观测结果并拍照。
4、 干胶制备
将SDS-PAGE电泳蛋白胶和玻璃纸置于含微量甘油的去离子水中2min，先将一层玻璃纸置于一块大小与胶相当的玻璃板上，赶尽气泡，将SDS-PAGE电泳蛋白胶置于玻璃纸上，其上再放置一张玻璃纸，三明治夹层之间不能含有气泡。置于室温下晾干。
5、 电泳结果
SDS-PAGE快速染色脱色及干胶制备方法 （转）
图 1 大肠杆菌全蛋白的SDS-PAGE电泳
Fig 1 Coloration of total protein of E.coli
SDS-PAGE快速染色脱色及干胶制备方法 （转）
图 2 植物蛋白的SDS-PAGE染色效果
Fig 2 Coloration of SDS-PAGE of protein of plants

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