复合自动诱导培养基配方及操作方法
由于大肠杆菌具有遗传背景清楚、易操作、生长迅速、表达量高、培养成本低等优点,再加上多年来外源基因表达的经验使其在大多数科研与应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。
目前,在大肠杆菌表达系统中,外源蛋白的表达产量成为其广泛应用的瓶颈。为了提高大肠杆菌的表达效率,研究者们已经做了大量工作,取得了很多进展，其中包括提高DNA转录水平,增强RNA的翻译效率,促进蛋白质的正确折叠和稳定性等等。然而对于使用大肠杆菌表达系统来说,最有可能极大提高外源蛋白表达量的策略就取决于发酵过程的改善以及利用代谢工程改变宿主代谢途径。然而在提高蛋白产量的同时另外一个问题常常使研发者烦恼：“大肠杆菌表达的蛋白很多时候是以不溶解的包涵体状态表达的。”
若你所要表达的目的蛋白不能表达，所有的条件（不同的诱导温度、不同的诱导时间、不同的诱导剂浓度）都进行了试验还是没有有所突破，这时你可以试一试采用大肠杆菌自诱导的方法。我们知道很多蛋白在不加诱导剂的情况下有微量的表达，但是这微量表达的蛋白反而会对目的蛋白的大量表达产生抑制！还有不同抗性的表达质粒在长时间培养抗性消失时会发生不同情况的质粒丢失！特别是氨苄抗性的质粒！此时你也可以考虑采用联合自动诱导的方法。
在复合培养基中有3种碳源———葡萄糖、乳糖和甘油,葡萄糖是大肠杆菌最偏爱的碳源,并且还与其它碳源存在竞争关系,也就是说当葡萄糖存在时,其被大肠杆菌优先利用,直到其被耗尽时,才代谢其他碳源,这也就是“自动诱导”培养基形成的理论基础。这种类型培养基来说葡萄糖是诱导前期的最佳碳源。当葡萄糖被耗尽时,乳糖代谢生成诱导剂———半乳糖,但是大肠杆菌不能利用半乳糖,这就造成了能源极大浪费,影响大肠杆菌诱导后期的生长以及蛋白的表达量。甘油可以作为诱导后期良好的碳源,从而促进菌的生长,提高蛋白的表达量;并且伴随着最近几年来甘油价格的大幅度下降,甘油作为大肠杆菌发酵培养的碳源而备受亲睐。复合自动诱导培养基正是利用以上原理在不添加IPTG诱导剂的情况下减少IPTG对细菌的毒害作用，同时增加可溶性蛋白的表达量。
自动诱导培养基配方如下：
胰蛋白胨
酵母提取物
由于大肠杆菌具有遗传背景清楚、易操作、生长迅速、表达量高、培养成本低等优点,再加上多年来外源基因表达的经验使其在大多数科研与应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。
目前,在大肠杆菌表达系统中,外源蛋白的表达产量成为其广泛应用的瓶颈。为了提高大肠杆菌的表达效率,研究者们已经做了大量工作,取得了很多进展，其中包括提高DNA转录水平,增强RNA的翻译效率,促进蛋白质的正确折叠和稳定性等等。然而对于使用大肠杆菌表达系统来说,最有可能极大提高外源蛋白表达量的策略就取决于发酵过程的改善以及利用代谢工程改变宿主代谢途径。然而在提高蛋白产量的同时另外一个问题常常使研发者烦恼：“大肠杆菌表达的蛋白很多时候是以不溶解的包涵体状态表达的。”
若你所要表达的目的蛋白不能表达，所有的条件（不同的诱导温度、不同的诱导时间、不同的诱导剂浓度）都进行了试验还是没有有所突破，这时你可以试一试采用大肠杆菌自诱导的方法。我们知道很多蛋白在不加诱导剂的情况下有微量的表达，但是这微量表达的蛋白反而会对目的蛋白的大量表达产生抑制！还有不同抗性的表达质粒在长时间培养抗性消失时会发生不同情况的质粒丢失！特别是氨苄抗性的质粒！此时你也可以考虑采用联合自动诱导的方法。
在复合培养基中有3种碳源———葡萄糖、乳糖和甘油,葡萄糖是大肠杆菌最偏爱的碳源,并且还与其它碳源存在竞争关系,也就是说当葡萄糖存在时,其被大肠杆菌优先利用,直到其被耗尽时,才代谢其他碳源,这也就是“自动诱导”培养基形成的理论基础。这种类型培养基来说葡萄糖是诱导前期的最佳碳源。当葡萄糖被耗尽时,乳糖代谢生成诱导剂———半乳糖,但是大肠杆菌不能利用半乳糖,这就造成了能源极大浪费,影响大肠杆菌诱导后期的生长以及蛋白的表达量。甘油可以作为诱导后期良好的碳源,从而促进菌的生长,提高蛋白的表达量;并且伴随着最近几年来甘油价格的大幅度下降,甘油作为大肠杆菌发酵培养的碳源而备受亲睐。复合自动诱导培养基正是利用以上原理在不添加IPTG诱导剂的情况下减少IPTG对细菌的毒害作用，同时增加可溶性蛋白的表达量。
自动诱导培养基配方如下：
胰蛋白胨
酵母提取物