犬猫交叉配血实验步骤(可存为word文档贴在实验室)
2015-01-02 20:40阅读:
1.采血做血常规。
采受血犬(A)和供血犬(B)血液各0.5-1ml,以EDTA抗凝。分别做CBC。(HCT是输血量计算重要参考)
2.分离血浆。
将两份血样以2000r/min转速离心5min,分离出供血犬血浆(B1)和红细胞(B2),受血犬血浆(A1)和红细胞(A2),血
浆放入1.5ml无抗凝剂子弹头,标记备用。
3.洗供血犬和受血犬红细胞。
移液器吸取红细胞(A2.B2)100ul放入子弹头,用移液枪加500ul生理盐水,反复抽吸(至少30下)混匀为红细胞悬液。将A2.B2悬液2000r/min离心5min。将上清液移除,再分别加入500ul生理盐水,反复抽吸混匀离心。重复洗红细胞3次以上。最后一次离心除去上清液,得到干净的红细胞(A3.B3)
4.配制受血犬和供血犬3-5%红细胞悬液。
吸取干净红细胞(A3.B3)20ul于无抗凝新子弹头,加入400ul生理盐水,混合均匀即为3-5%红细胞悬液(A4.B4)0.4ml。
5.交叉反应。
主配:供血犬红细胞悬液+受血犬血浆。
副配:受血犬红细胞悬液+供血犬血浆。
玻片法:滴50ul红细胞悬液在一张干净载玻片上,再滴上相对应血浆100ul,轻轻抖动玻片混合均匀。静置20min加入50ul
生理盐水观察结果。
子弹头静置法:滴50ul红细胞悬液在洁净子弹头内,再滴l00ul对应的血浆,盖上子弹头盖子。轻弹子弹头混合均匀,放置在37恒温箱20min。之后滴一滴在载玻片观察是否凝集。
分级凝集情况填写。
主配()
副配()
0=无凝集。
1+=在自由红细胞中可见多个小凝粒。
2+=存在有大凝块,并混有小团块。
3+=许多大凝块。
4+=凝成一块,无自由红细胞。
注:配血结束后要保留受血犬红细胞悬液和血浆以备再次配血。
输血量计算。
犬输血量(ml)=2.2*受血犬体重(kg)*40*[(目标HCT-受血犬HCT)/供血犬HCT]
猫输血量(ml)=2.2*受血犬体重(kg)*30*[(目标HCT-受血猫HCT)/供血猫HCT]