【嘉美生物】
DNA连接酶（DNA Ligase）也称DNA黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是连接DNA链3‘-OH末端和，另一DNA链的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。1、如何理解DNA连接酶
的作用特点?教科书的观点：DNA连接酶无特异性，其催化
DNA 片段末端连接的情况分两种：(1)催化相同或互补的黏性末端连接；(2)催化同一种限制酶切割产生的平末端连接。两种情况下，末端的“拼接”都会形成“回文序列”。
然 而，在基因工程(Genetic Engineering)的实际操作中，催化DNA片段末端连接的方法是非常灵活的。例如，当目的序列和载体上没有相同的限制性内切酶位点可供利用时，而 用不同的限制性内切酶切割后的黏性末端不能互补结合，则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端，再用T4DNA连接酶连接，但平末端连接要比 黏性末端连接的效率低得多。 由此可见，DNA连接酶可以催化两种不同限制酶切割产生的平末端连接，而两个平末端拼接后，并不是“回文序列”。
结论：DNA连接酶催化两个末端连接形成的新序列并不都是“回文序列”。(注：回文序列——双链DNA分子中一段旋转对称的核苷酸序列，即以对称轴为轴心旋转180°后呈对称状态，它是大多数限制性内切酶的识别位点。《中国百科大辞典》)
2、如何理解“双酶切”策略下基因表达载体的构建和筛选?在 构建基因表达载体时，最简单的重组方式就是在目的基因DNA的两端用两种不同的限制性酶进行酶切，产生两个不同的黏性末端。再用这两种限制酶对合适的载体 进行酶切，也产生两个不同的粘性末端。酶切后的目的基因和载体，由于它们各自的两个末端不同，都不会发生自身环化。然后在DNA连接酶的催化下，目的基因 片段只能从一个方向插入载体中(同一种限制酶切割产生的相同黏性末端才可以连接)，重组的效率较高，也易于筛选出重组子。
DNA连接酶（DNA Ligase）也称DNA黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是连接DNA链3‘-OH末端和，另一DNA链的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗ATP。1、如何理解DNA连接酶
的作用特点?教科书的观点：DNA连接酶无特异性，其催化
DNA 片段末端连接的情况分两种：(1)催化相同或互补的黏性末端连接；(2)催化同一种限制酶切割产生的平末端连接。两种情况下，末端的“拼接”都会形成“回文序列”。
然 而，在基因工程(Genetic Engineering)的实际操作中，催化DNA片段末端连接的方法是非常灵活的。例如，当目的序列和载体上没有相同的限制性内切酶位点可供利用时，而 用不同的限制性内切酶切割后的黏性末端不能互补结合，则可用适当的酶将DNA突出的末端削平或补齐成平末端，再用T4DNA连接酶连接，但平末端连接要比 黏性末端连接的效率低得多。 由此可见，DNA连接酶可以催化两种不同限制酶切割产生的平末端连接，而两个平末端拼接后，并不是“回文序列”。
结论：DNA连接酶催化两个末端连接形成的新序列并不都是“回文序列”。(注：回文序列——双链DNA分子中一段旋转对称的核苷酸序列，即以对称轴为轴心旋转180°后呈对称状态，它是大多数限制性内切酶的识别位点。《中国百科大辞典》)
2、如何理解“双酶切”策略下基因表达载体的构建和筛选?在 构建基因表达载体时，最简单的重组方式就是在目的基因DNA的两端用两种不同的限制性酶进行酶切，产生两个不同的黏性末端。再用这两种限制酶对合适的载体 进行酶切，也产生两个不同的粘性末端。酶切后的目的基因和载体，由于它们各自的两个末端不同，都不会发生自身环化。然后在DNA连接酶的催化下，目的基因 片段只能从一个方向插入载体中(同一种限制酶切割产生的相同黏性末端才可以连接)，重组的效率较高，也易于筛选出重组子。