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高保真聚合酶,何时必须要用

2015-11-05 14:04阅读:
DNA聚合酶的保真度是指准确复制目的模板的结果,厂家一般都会提供一个选择指南,列出每个产品的特异性、保真度、产量等。
DNA聚合酶保真度的相对高低常与Taq DNA聚合酶比较。
NEBNew England Biolabs)的科学家测定Taq聚合酶的错误率每3700个碱基1个错误。这些数据表明,利用Taq25PCR循环扩增400 bp的片段,可能一半的克隆都带有错误。对于较大的片段如1 kb,每个克隆都可能带有不想要的突变。相比之下,NEBQ5超保真聚合酶的错误率比Taq100倍即:200个克隆中的199个将是正确的。
在设计PCR实验时,首先要考虑你的应用是否需要高保真聚合酶。
如果实验结果依赖于正确的DNA序列(如做基因克隆或测序),或片断比较长或对序列要求严格,那么就要应用高保真聚合酶,尽量减少错配核苷酸的掺入,
对于普通PCR或菌落PCR,确定扩增子是否存在或质粒上是否带有插入片段,或者DNA片段不长或对序列要求不太严格,选用Taq 酶即可 。

DNA 聚合酶目前主要分以下几种:
第1代:TaqDNA 聚合酶
第2代:LADNA 聚合酶:2×LA GC Master Mix针对复杂结构模板(如高 GC 含量和二级结构),扩增保真
性要求较高的 DNA 片段
第3代:Prime Star(Pyrobest DNA)聚合酶
升级版:Pfu DNA 聚合酶:2×Pfu Master Mix适用于对保真性要求较高的 DNA 片段的扩增,如基因克隆、定点突变、SNP 分析,测序等,

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