今天备课,到噬菌体这个实验了。然后脑子里有个怪圈,上清液和沉淀中这少量放射性是实验允许的误差,或者是人为消除不了的误差,还是实验失误造成的?
为什么有这样的一个问题呢,我是这样想的:我们做实验实际时都是力求接近理论数值,但允许偏差,但是做为一个经典实验,如果误差是可消除的,当这个实验做的没有误差是最好的,如果真的有误差存在,做为一个科学家,肯定是力求去让这个实验最完美,误差越小越好,没有误差更好。
我手头有本《重难点手册》,里面在分析为什么会出现少量误差,这让我很别扭,如果允许这误差存在,我认为分析这误差的原因就很怪。查了些资料,了解了下一些题目,有了一些自己的看法:
第一篇是王甫荣老师的对噬菌体侵染细菌实验的再认知
文章里有这样的两个误差分析纠正:
1.用35S标记的噬菌体侵染细菌,理论上沉 淀物中不含放射性,但实际上含有少量放射性的原因是什么?
通常的分析:可能由于搅拌不充分或离心时间过短或转速过低等原因,有少量含35S的噬菌体外壳仍吸附在细菌表面,随细菌离心到沉淀物中,使沉淀物中出现了少量的放射性。
纠正:其实,不是搅拌不彻底,而是在保证细菌结构稳定的前提下, 搅拌不可能将吸附在细菌表面的噬菌体全部剥落下来 (大约剥落75%),导致部分吸附在细菌表面的噬菌体 外壳随细菌沉降,使沉淀物中也有较弱的放射性。
2.用32P标记的噬菌体侵染细菌,上清液中含有较弱放射性的原因是什么?
通常的分析:(1)保温时间过短,有一部分噬菌体未侵入细菌细胞内,经离心后分布于上清液中,使上清液出现放射性。(2)从噬菌体和细菌混合培养到用离心机分离,这一段保温时间过长,噬菌体在细菌内增殖后释放出的子代经离心后分布于上清液中,也会使上清液的放射性升高。
纠正:赫尔希和蔡斯实验的实际步骤是:标记→侵染→离心→培养→搅拌→离心→检测。侵染后离心的目的就是去除未吸附的噬菌体,所以上清液中的放射性不是未吸附细菌的噬菌体携带的。在噬菌体一步生长曲线的基础上,赫尔希和蔡斯严格控制实验时间在20min内。离心前细菌处于潜伏期,尚未裂解。
为什么有这样的一个问题呢,我是这样想的:我们做实验实际时都是力求接近理论数值,但允许偏差,但是做为一个经典实验,如果误差是可消除的,当这个实验做的没有误差是最好的,如果真的有误差存在,做为一个科学家,肯定是力求去让这个实验最完美,误差越小越好,没有误差更好。
我手头有本《重难点手册》,里面在分析为什么会出现少量误差,这让我很别扭,如果允许这误差存在,我认为分析这误差的原因就很怪。查了些资料,了解了下一些题目,有了一些自己的看法:
第一篇是王甫荣老师的对噬菌体侵染细菌实验的再认知
文章里有这样的两个误差分析纠正:
1.用35S标记的噬菌体侵染细菌,理论上沉 淀物中不含放射性,但实际上含有少量放射性的原因是什么?
通常的分析:可能由于搅拌不充分或离心时间过短或转速过低等原因,有少量含35S的噬菌体外壳仍吸附在细菌表面,随细菌离心到沉淀物中,使沉淀物中出现了少量的放射性。
纠正:其实,不是搅拌不彻底,而是在保证细菌结构稳定的前提下, 搅拌不可能将吸附在细菌表面的噬菌体全部剥落下来 (大约剥落75%),导致部分吸附在细菌表面的噬菌体 外壳随细菌沉降,使沉淀物中也有较弱的放射性。
2.用32P标记的噬菌体侵染细菌,上清液中含有较弱放射性的原因是什么?
通常的分析:(1)保温时间过短,有一部分噬菌体未侵入细菌细胞内,经离心后分布于上清液中,使上清液出现放射性。(2)从噬菌体和细菌混合培养到用离心机分离,这一段保温时间过长,噬菌体在细菌内增殖后释放出的子代经离心后分布于上清液中,也会使上清液的放射性升高。
纠正:赫尔希和蔡斯实验的实际步骤是:标记→侵染→离心→培养→搅拌→离心→检测。侵染后离心的目的就是去除未吸附的噬菌体,所以上清液中的放射性不是未吸附细菌的噬菌体携带的。在噬菌体一步生长曲线的基础上,赫尔希和蔡斯严格控制实验时间在20min内。离心前细菌处于潜伏期,尚未裂解。
