在核酸、蛋白浓度检测过程中,230nm、260nm、280nm这几个数值经常会出现,那这几个数值代表什么?他们之间的最优关系又是什么呢?
数值的意义:
230nm:碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,与A260的比值可进行核酸样品纯度评估。A230产生负值可能是由于在低核酸浓度的样液中存在一些干扰成分。
260nm:核酸最高吸收峰的吸收波长,其吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的,所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质,不论是核苷、核苷酸或核酸在260nm处都会一个最高吸收峰。
280nm:蛋白质由于含有芳香氨基酸,因此也能吸收紫外光,通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处。其与260nm处的吸光度比值,经常被用于判断核酸样品的纯度。
除了这三个常见的波长外,在核酸检测过程中340nm往往会被用来检测样品缓冲液的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0,如果不是,表明溶液中有悬浮物。

图1. 核酸、蛋白质吸光度谱
比值的意义:
260/230、260/280
纯度好的DNA或RNA,在pH7-8.5下:
A260 / A280比值应大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。
如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
较纯净的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之间。
比值降低往往是样品中存在一些污染物,如碳水化合物、盐(胍
数值的意义:
230nm:碳水化合物最高吸收峰的吸收波长,与A260的比值可进行核酸样品纯度评估。A230产生负值可能是由于在低核酸浓度的样液中存在一些干扰成分。
260nm:核酸最高吸收峰的吸收波长,其吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的,所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质,不论是核苷、核苷酸或核酸在260nm处都会一个最高吸收峰。
280nm:蛋白质由于含有芳香氨基酸,因此也能吸收紫外光,通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处。其与260nm处的吸光度比值,经常被用于判断核酸样品的纯度。
除了这三个常见的波长外,在核酸检测过程中340nm往往会被用来检测样品缓冲液的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0,如果不是,表明溶液中有悬浮物。
图1. 核酸、蛋白质吸光度谱
比值的意义:
260/230、260/280
纯度好的DNA或RNA,在pH7-8.5下:
A260 / A280比值应大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。
如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
较纯净的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之间。
比值降低往往是样品中存在一些污染物,如碳水化合物、盐(胍
