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凝集素之：刀豆蛋白A（ConcanavalinA，ConA）及荧光标记物专题

2018-09-07 15:17阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/5948434894

刀豆蛋白A（Concanavalin A，Con A）产品专题

搜索关键词：
淋巴细胞转化实验（T Lymphocyte Transformation Test），非特异性有丝分裂原（mitogen），T细胞活化和增殖，Con A，Concanavalin A ，伴刀豆凝集素，植物血球凝集素PHA，CAS：11028-71-0

基本描述：
刀豆蛋白A（Concanavalin A，Con A），来源于Canavalia ensiformis洋刀豆（刀豆），是一种凝集素蛋白（Mw 104kDa）。pH≥7.0条件下，Con A以同质四聚体结构形式存在，由四个分子量为26kDa的亚基构成。酸性条件（pH 4.5-5.5）下，Con A解离为活化的二聚体结构（52kDa）。每一个单体，不管pH值或分子结构如何，都包含2个金属离子结合位点。金属离子（Ca2+ 和 Mn2+ ）必须结合到这两个位点上Con A才能发挥活性。乙酰化、琥珀酰化或其他衍生物也能产生稳定的二聚体结构形式。
刀豆蛋白A（Concanavalin A，Con A）无血型特异性，但选择性结合发现于各种糖蛋白、糖脂和糖类分子上的α-甘露糖基（α-mannosyl residues）和α-葡糖基残基（α-glucosyl residues），需要Ca2+ 和 Mn2+ 离子存在才能显示活性。Con A适用于碳水化合物研究，糖蛋白纯化，酶标记（enzyme tagging），细胞膜研究，细胞凝集，和细胞分型研究。

功能应用：
Con A是第一个商业化
的凝集素，普遍用于生物和生物化学领域，来鉴定糖蛋白和其他含糖分子。
Con A在凝集素亲和层析色谱中用来纯化生物大分子。
Con A与各种含甘露糖碳水化合物（血清和膜糖蛋白）的受体相互作用。
Con A使得红细胞强烈凝集，不具有血型特异性。胰酶消化后正常细胞会再凝集。
Con A是淋巴细胞的一种促有丝分裂原（mitogen），主要用于诱导T淋巴细胞的有丝分裂活性和提高细胞代谢物的合成量。
Con A与许多细菌，像大肠杆菌、盘基网柄菌和枯草芽孢杆菌等相互作用。
Con A普遍认为参与HIV病毒表面的α-甘露寡糖和人T淋巴细胞之间的相互作用。

懋康生物提供几种类型的刀豆蛋白A，包括纯化的刀豆蛋白A和不同荧光标记的刀豆蛋白A，满足科研用户的多方位需求。

一、纯化的刀豆蛋白A（Concanavalin A, Unconjugated）
货号
 产品名称
 规格
价格（元）
MP6306-25MG
Concanavalin A (Con A) 刀豆蛋白A
 25mg
 200
MP6306-100MG
 Concanavalin A (Con A) 刀豆蛋白A
 100mg
 650
MP6307-100UL
 Concanavalin A (Con A) Solution (500×) 刀豆蛋白A
100μL
 850
【提示】：Concanavalin A (500×)是无菌溶液，浓度1.25mg/ml，适用于体外细胞培养，特别设计用于人和小鼠白细胞的活化。

二、荧光标记的刀豆蛋白A（Concanavalin A, Fluorescent conjugated）
货号
 产品名称
 规格
价格（元）
MP6321-5MG
FITC labeled Concanavalin A FITC 标记刀豆蛋白A
 5mg
 1285
MP6322-5MG
 Rhodamine labeled Concanavalin A 罗丹明标记刀豆蛋白A
5mg
 985
【提示】：两种荧光素标记的刀豆蛋白A以溶液形式提供，浓度5mg/ml，基本不含未标记的荧光素。常用工作浓度为5-20μg/ml，适用于免疫荧光和糖生物学研究。

常见问题（由MKBio整理)
1） FITC标记刀豆蛋白（FITC-ConA）（# MP6321-5MG）的建议工作浓度是多少？ 如何配制染色工作液？
回复：本品用于免疫荧光染色（IF）的建议工作浓度是5-20μg/ml，用户可根据自身的实际需求或参考文献来进行工作浓度的优化。可用生理缓冲液如PBS，HEPES等稀释到工作浓度。
2） FITC标记刀豆蛋白（FITC-ConA）（# MP6321-5MG）进行免疫荧光染色（IF）的建议孵育条件如何？
回复：一般孵育条件是室温（RT）孵育30min，也可于4℃孵育30-1h。具体的孵育条件请根据自身的实际需求或参考文献来进行优化。
相关文献a）The Candida albicans ENO1 gene encodes a transglutaminase involved in growth, cell division, morphogenesis, and osmotic protection. PMID: 29386353. 【Cells were washed twice with 1× PBS, permeabilized with 70% ethanol, incubated with 2 μg/ml FITC-ConA in 1× PBS for 30 min at room temperature, washed twice with 1× PBS, and analyzed in the flow cytometer. The maximum excitation wavelength was 495 nm, and the maximum emission wavelength was 515 nm.】
相关文献b）Staining of the inner acrosomal membrane of human spermatozoa with concanavalin A lectin as an indicator of potential egg penetration ability. PMID: 1718787. 【Spermatozoa were pelleted by microcentrifugation, and excess fixative was removed. The pellet was resuspended in a small volume of fixative remaining and 20μl aliquots of fixed sperm suspension were allowed to air dry on poly-L-lysine-treated slides. The slides were then rinsed in 0.2 M glycine followed by a second wash in 10 mM phosphate buffered saline (PBS). Spermatozoa were labeled with 25μl of 100μg FITC-ConA/mL in PBS for 25 minutes at RT. Slides were rinsed with excess PBS and mounted in medium16 before immediate examination at a magnification of 400X under an Olympus BHT microscope.】
3） FITC标记刀豆蛋白（FITC-ConA）（# MP6321-5MG）如何进行视网膜血管染色？
回复：很多临床前实验表明在各种FITC标记的凝集素中刀豆蛋白A对视网膜血管（retinal vasculature）能表现出最均匀的染色结果。很多文献用FITC-ConA来标记血管壁上粘附的白细胞和血管内皮细胞。使用方法可参考以下文献：
文献a）Simvastatin Inhibits Leukocyte Accumulation and Vascular Permeability in the Retinas of Rats with Streptozotocin-Induced Diabetes. PMID: 15111316.【Six different rats were used in each group. After the induction of deep anesthesia, the chest cavity was carefully opened and a 20-gauge perfusion cannula was introduced into the aorta. Drainage was achieved by opening the right atrium. The animals were then perfused with 100 ml of phosphate-buffered saline (PBS) to wash out blood cells in the vessels, such as erythrocytes and nonadherent leukocytes. After PBS perfusion, the animals were perfused with 25 ml of fluorescein isothiocyanate (FITC)-labeled concanavalin A lectin (ConA; 40 μg/ml in PBS, pH 7.4). ConA was used to label leukocytes adherent to the vessel walls. Residual unbound ConA was removed with PBS perfusion. The retina was carefully removed and fixed with 1% paraformaldehyde, and flat mounts were prepared using a fluorescence anti-fading medium. The retinas were then observed using fluorescence microscopy】
文献b）VEGF164 Is Proinflammatory in the Diabetic Retina. PMID: 12714656 【Perfusion with FITC-ConA or Rhodamine-Con A (40 μg/mL in PBS [pH 7.4], 5 mg/kg BW) was then performed to label adherent leukocytes and vascular endothelial cells, followed by removal of residual unbound lectin with PBS perfusion.】
植物凝集素系列相关产品：
1） 见我司懋康生物整理的植物血凝素PHA（PHA-L，PHA-M，PHA-E，PHA-P）产品专题和信息。
2） 见我司懋康生物整理的番茄凝集素Tomato-Lectin产品专题和信息。
3） 见我司懋康生物整理的加纳籽凝集素I-同工凝集素B4（GSL I-B4，BSL I-B4）产品专题和信息。
4） 见我司懋康生物整理的刀豆蛋白凝集素Concanavalin A产品专题和信息。
5） 更多凝集素产品逐渐开发中。。。。。。

几种常用几种植物凝集素的生理特征（血型特异性、糖类专一性、特定应用）：
凝集素来源
 常用缩写
 促有丝分裂活性
 血型特异性
 倾向结合的
糖类专一性
 抑制剂或
洗脱糖类
 特定应用
刀豆
 ConA
 有
 非特异性
 αMan, αGlc
 MeαMan+MeαGlc
 多聚赖氨酸和组蛋白连接物用作载体，将基因转染到气道上皮细胞。胰岛素样活性。
花生Peanut
 PNA
 无
 T antigen (M，N)
 Galβ3GalNAc
 Gal
 大肠癌标签抗原重定位的检测
菜豆Phaseolus vulgaris
 PHA-E
 有
 A（-SA）
 Galβ4GlcNAcβ2Manα6
(GlcNAcβ4) (GlcNAcβ4Manα3) Manβ4
 牛甲状腺球蛋白（TG），乙酸
 结合中枢神经系统细胞（HNK-1抗原）
菜豆Phaseolus vulgaris
 PHA-L
 有
 —
 Galβ4GlcNAcβ6(GlcNAc β2Manα3)Manα3
 牛甲状腺球蛋白（TG），乙酸
 顺行性神经示踪；转移性肿瘤标志物；淋巴因子生产用的淋巴分裂原；
四棱豆Psophocarpus tetragonolobus II
 PTL II, WBA II
 无
 O（-SA）
 GalNAc, Gal
 GalNAc
 血型O个体的血管染色（人）
大豆Soybean
 SBA
 有
 A>O>B
 α>βGalNAc
 GalNAc
 干细胞分选
荆豆Ulex europaeus I
 UEA I
 无
 O>A2
 α-Fuc
 L-Fuc
 人内皮细胞标志物
麦芽
Wheat Germ
 WGA
 无
 A,B,O
 GlcNAc
 几丁质水解酶或GalNAc
 胰岛素受体纯化，神经示踪，细菌细胞壁结合
番茄Lycopersicon esculentum
 LEL, TL
 无
 非特异性
 (GlcNAc)2-4
 几丁质水解酶
 小鼠灌注研究（与血管内皮结合）
加纳籽Griffonia (Bandeiraea) simplicifolia I
 GSL I, BSL I
 无
 B>>A1
 αGal, αGalNAc
 Gal/GalNAc
 内皮细胞标志物（小鼠）
加纳籽Griffonia (Bandeiraea) simplicifolia I Isolectin B4
 GSL I – B4
 无
 B
 αGal
 Gal或棉子糖
 非灵长类内皮细胞标志物；神经元标志物；
Griffonia (Bandeiraea) simplicifolia II
无
 A (-SA)>>B (-SA)
 α or βGlcNAc
 几丁质水解酶或GlcNAc
 选择性染色高尔基体；子宫血管或某些癌症标志物；
糖类缩写：
Fuc: L-Fucose；Man: Mannose；Gal: D-Galactose; GalNAc: N-Acetylgalactosamine;
Glc: D-glucose; GlcNAc: N-Acetylglucosamine;

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持'品质保障'的原则为广大客户提供优质产品。

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