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多肽合成切割的8个小知识

2024-05-21 09:14阅读:
之前固拓小编发过一次固拓生物的#多肽切割操作流程,现在又整理了一波小知识,希望能够帮助到大家。多肽切割在固相合成中有着很关键的作用,如果切割的干净,不仅能提高收率也给纯化工作带来便捷。刚刚接触多肽合成的小伙伴们,通常都会在切割液的选择有许多的疑问,那么让我们聊聊多肽切割的一些小知识。
切割(Cleavage)属于肽合成的后处理部分,是指将已合成的肽从载体(树脂)上切割下来。有人认为也包括脱去侧链保护。切割及去保护是合成中最重要步骤。如果试剂和反应条件选择不当,产物会发生不可逆的修饰而被破坏,因此在切割时应注意以下几个问题:
1、选择合适的试剂浓度、反应时间、温度等条件;
2、根据合成肽氨基酸的不同而选择合适的切割及脱保护试剂;
3、氨基酸侧链的保护,在切割时,切割剂或切割产物可能对一些对其敏感氨基酸侧链造成破坏或修饰,因此,反应时要选择合适试剂和条件,必要时,对敏感侧链进行保护,使其遭到最小程度的破坏。
一、什么是“切割”?
固相合成结束后,如果想从树脂上切下多肽,需要选择合适的切割试剂,然后用冰乙醚
沉淀,离心采集沉淀物,通过HPLC分离纯化,冷冻干燥获得产品。(下列切割均针对树脂进行处理)
二、是前后切割过程。
多肽合成切割的8个小知识
三、切割流程
准备要切割的树脂
这里只需要树脂里面的溶剂成分被洗涤掉并充分干燥树脂,理想状态是:像干燥的沙子一样,不容易占到其它物体的表面,例如瓶子或者纸。
四、切割液的选择与配置
这方面资料在网上也有很多,针对不同的多肽序列,选择不同的切割液种类。
这里主要列几种常见的切割液比例。
1)TFA:H2O=95%:5%、TFA:H2O=97.5%:2.5%
2)TFA:H2O:TIS=95%:2.5%:2.5%
3)三氟乙酸:茴香硫醚:1,2-乙二硫醇:苯酚:水=87.5:5:2.5:2.5:2.5
前两种适合没有容易氧化的氨基酸,例如Trp、Cys、Met。第三种都可以使用。(每1g树脂加8ml左右的切割液)
当然还有很多特殊的切割方法,会大大提高产物收率,具体的问题,可以联系小编13355716090(微信手机同号)
五、切割过程
一般时间在2.5小时左右,要不断地震动,温度为室温。
有些多肽很容易氧化或变质,还需要排除容器内的空气(用氮气代替),有时还需要适当降低环境温度,比如0-10。
六、抽滤器收集滤液
抽滤的方法很多,每个实验室都有自己的方法,小编主要说下,这是的滤液里面含有被切割下来的多肽和一部分侧链保护基团。一些不溶于TFA的保护基团,例如Pbf,是一种白色漂浮物,同树脂一起被过滤掉了。
七、沉淀,离心,洗涤
小编认为 这个步骤是最影响收率的一步,处理不好的话,就会损失很多 多肽。
1)溶剂:沉淀用的是冰乙醚,这里的冰字是要求 乙醚的温度要很低,例如放置在-20摄氏度的冰箱里面。当然使用常温的乙醚,也是可以的。乙醚和滤液的体积比为6:1比较合适。
2)仪器:能达到3000转每分钟的离心机
3)方法:在时间允许的情况下,小编建议 把滤液往6倍体积的冰乙醚慢慢地滴加,可以用磁力搅拌器搅拌冰乙醚。目标是让刚加进去的滤液立刻析出多肽。
4)离心:把已经析出,变白的溶液离心即可。
5)洗涤:一般建议洗涤3次,每一次都要把溶液搅拌均匀。
八、抽干,得到粗品肽
离心3次之后的肽,各种侧链保护基团基本被乙醚洗涤了,这时只要将湿的多肽放到 真空釜 抽干即可。(别放恒温箱里面)
我相信如果你按照上面的步骤一步一步来,你一定会得到理想的回报。因为很多多肽都有自己的特殊性,如果遇到一些特殊情况,可以随时联系小编。


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