HE染色常见问题与对策（2）

3、细胞核过染，即苏木精染色太深，甚至苏木精染液的分布占据了细胞质的位置（图3）
　　原因：此类问题可能有3个影响因素，即切片在苏木精染色液停留过长、切片太厚、分化步骤时间太短。
　　对策：如果切片不是因为太厚（用显微镜仔细上下调节微调，只有一二层细胞核层次），脱色、漂白、重新染色，对于染色和分化时间做些适当的调整。如果确定是由于切片太厚导致的细胞核过染，则需要重新切片。

4、细胞核呈红、棕色改变（图4）
　　原因：主要有苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。
　　对策：首先，每次染色之前检查苏木精染色液的染色能力，发现氧化过度应及时更换。其次，可用流水、温水或弱碱性溶液如稀氨水、0.2%碳酸氢钠等，在苏木精染色后，给切片以足够的蓝化时间。
　　图3皮肤切片，细胞核过染，核膜、核仁等不清晰，细胞质（尤其是皮肤上皮细胞）含有大量的细胞核染色液苏木精，导致细胞核与细胞质比例失调
　　图4切片细胞核棕色，表明苏木精没有充分蓝化，或苏木精过度氧化失去染色能力
　　5、伊红着色淡（图5）
　　原因：伊红染液的pH值可能大于5;也可能是蓝化液残留过多；切片太薄；或切片经伊红染色后在乙醇脱水时间过长。
　　对策：检查伊红染液的pH值，如果必要的话，用乙酸将其调节在416～510之间，从而使伊红染色色彩艳丽。确保每次蓝化步骤完成后，使用的弱碱性溶液被充分洗去，玻片上没有残