Annexin
V检测细胞凋亡的原理正常细胞膜磷脂的分布是不对称的,膜内表面含负电的磷脂(如磷脂酰丝氨酸,PS),而膜外表面含有占绝大多数的中性磷脂。在细胞凋亡的早期,细胞膜内的PS会从内侧翻转到细胞膜表面。
Annexin V是一种钙依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。
PI是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,而早期凋亡细胞的细胞膜是完好的,对PI有拒染性。但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能透过细胞膜而使细胞核染上。
因此Annexin V 和PI同时使用,可以将凋亡早期的细胞与其它细胞区别开来。
细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI染色)检测的实验步骤:细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI染色)适用于:细胞未转染GFP或未使用红色药物。
1.收集细胞:包括漂浮在培养基上的细胞;之后,须把EDTA洗去,PBS或培养基重悬送样,正常组细胞分出200μl体积不染色;2.离心:1000转/分,5分钟,弃上清;3.重悬:加入200μl Binding Buffer,混匀;4.染色:加入
Annexin V是一种钙依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。
PI是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,而早期凋亡细胞的细胞膜是完好的,对PI有拒染性。但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能透过细胞膜而使细胞核染上。
因此Annexin V 和PI同时使用,可以将凋亡早期的细胞与其它细胞区别开来。
细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI染色)检测的实验步骤:细胞凋亡(Annexin V-FITC/PI染色)适用于:细胞未转染GFP或未使用红色药物。
1.收集细胞:包括漂浮在培养基上的细胞;之后,须把EDTA洗去,PBS或培养基重悬送样,正常组细胞分出200μl体积不染色;2.离心:1000转/分,5分钟,弃上清;3.重悬:加入200μl Binding Buffer,混匀;4.染色:加入
