一、细胞简介
平台编号：Bio-133113
规格：1×10Cells/T25培养瓶
细胞信息：DOK
细胞名称：人口腔黏膜癌前病变细胞
用途：研究
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、细胞特性
细胞名称：DOK人口腔黏膜癌前病变细胞
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一、细胞简介
平台编号：Bio-133113
规格：1×10Cells/T25培养瓶
细胞信息：DOK
细胞名称：人口腔黏膜癌前病变细胞
用途：研究
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）
二、细胞特性
细胞名称：DOK人口腔黏膜癌前病变细胞
产品类别：人源细胞系
生长特性：贴壁生长
培养体系：DMEM（高糖）+10S
传代方法：1：2传代
细胞形态：上皮细胞样
冻存条件：无血清细胞冻存液
传代方法：消化3-5分钟。1:2传代，3天内可长满。
培养体系：温度：37 ，气相：95%空气 ，5%CO2
细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。
冻存条件：无血清细胞冻存液
三、细胞收到后的处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）
四、细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
五、DOK (人口腔黏膜癌前病变细胞)接收后的操作流程与注意事项
1、细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。
2、如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。
3、贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（最高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。
4、生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。
六、DOK (人口腔黏膜癌前病变细胞)常规培养传代流程（请严格遵守无菌操作）
1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加1~2 ml 0.25% EDTA的胰酶消化（注意把握消化时间，通常控制在1~2min）。
2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁运动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。
3、取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，于培养箱中培养。
4、注意培养基PH值变化情况，定期换液，待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。
七、DOK (人口腔黏膜癌前病变细胞)特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）
1、收到细胞后请尽快更换为含10% FBS的新鲜培养基，切勿使用原瓶中运输用培养基。
2、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系实验室。
3、细胞任何售后问题，均需拍照存档并及时联系客服。
生长特性：贴壁生长
培养体系：DMEM（高糖）+10S
传代方法：1：2传代
细胞形态：上皮细胞样
冻存条件：无血清细胞冻存液
传代方法：消化3-5分钟。1:2传代，3天内可长满。
培养体系：温度：37 ，气相：95%空气 ，5%CO2
细胞描述：本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。
冻存条件：无血清细胞冻存液
三、细胞收到后的处理
细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）
四、细胞培养步骤
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。
3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。
PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。
五、DOK (人口腔黏膜癌前病变细胞)接收后的操作流程与注意事项
1、细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。
2、如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。
3、贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（最高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。
4、生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。
六、DOK (人口腔黏膜癌前病变细胞)常规培养传代流程（请严格遵守无菌操作）
1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加1~2 ml 0.25% EDTA的胰酶消化（注意把握消化时间，通常控制在1~2min）。
2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁运动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。
3、取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，于培养箱中培养。
4、注意培养基PH值变化情况，定期换液，待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。
七、DOK (人口腔黏膜癌前病变细胞)特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）
1、收到细胞后请尽快更换为含10% FBS的新鲜培养基，切勿使用原瓶中运输用培养基。
2、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系实验室。
3、细胞任何售后问题，均需拍照存档并及时联系客服。