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人脂肪干细胞永生化的常规培养传代流程!

2023-09-23 10:23阅读:
人脂肪干细胞永生化常规培养传代流程



一、细胞简介
平台编号:Bio-132174
规格:1×10Cells/T25培养瓶
细胞信息:永生化细胞
细胞名称:人脂肪干细胞永生化
用途:(免疫荧光鉴定)
注意事项:仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用(产品信息以出库为准)

二、细胞详述
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根据不同来源及分化阶段,干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞胚胎干细胞具有分化为多种不同组织的能力,但在伦理上存在争议。成体干细胞因其来源广泛、增殖能力强等特点,现已成为组织工程学研究的首选种子细胞。其中,脂肪干细胞作为组织工程修复的种子细胞,因其具有来源丰富、取材容易、增殖能力强等优点,正受到越来越多的关注。
脂肪干细胞形态类似成纤维细胞,具有较强的增殖能力。在一定的诱导条件下,可分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、上皮细胞等,具有多向分化潜能。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带Tert基因。

三、细胞特性
1)组织来源于人的正常脂肪组织。
2)细胞鉴定:CD44免疫荧光染色为阳性,CD45免疫荧光染色为阴性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5)细胞生长方式:长梭形细胞,不规则细胞,贴壁培养。

四、产品的运输和保存
视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

五、产品使用
1)本产品仅能用于科研
2)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
3)本产品未通过用于活体诊断的审核

六、常规培养传代流程(请严格遵守无菌操作)
1、吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加1~2 ml 0.25% EDTA的胰酶消化(注意把握消化时间,通常控制在1~2min)。
2、镜下观察消化情况,在细胞边缘缩小,贴壁运动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6~8ml 完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落、吹散。
3、取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,于培养箱中培养。
4、注意培养基PH值变化情况,定期换液,待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。

七、特别注意:(如使用公共实验室或初次接触细胞培养,建议添加双抗培养)
1、收到细胞后请尽快更换为含10% FBS的新鲜培养基,切勿使用原瓶中运输用培养基。
2、如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时拍照并联系实验室。
3、细胞任何售后问题,均需拍照存档并及时联系客服。

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