永生化小鼠骨髓源巨噬细胞的处理方法与培养步骤！

2024-08-01 14:02阅读：

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永生化小鼠骨髓源巨噬细胞的处理方法与培养步骤！

小鼠骨髓来源巨噬细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等，某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨（如脓骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如骼骨）的稀松骨质间的网限中，是—种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。

一、产品信息
平台编号：Bio-137176
规格：1×10Cells/T25培养瓶
细胞信息：IBMDM
细胞名称：IBMDM永生化小鼠骨髓源巨噬细胞
产品类别：小鼠细胞系

生长特性：贴壁
培养体系：专用培养基
细胞形态：贴壁
细胞用途：研究
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞详述
巨噬细胞源自单核细胞，属于免疫细胞，有多种功能，属不繁殖细胞群，难以长期培养。
巨噬细胞在吞噬和清除异物和衰老死亡细胞、分泌生物活性物质，调节血细胞生成与参与免疫应答等方面发挥着广泛的生物学作用，是一类在体内发挥重要免疫效应的细胞，为体内的稳态维持和组织防御提供保障。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。
注意事项：收到细胞后第一次传代建议1：2传代，充液培养基是维持培养基，不能用来培养细胞。

三、细胞特性
1)组织来源于实验动物的正常骨髓组织。
2)细胞鉴定：CD68和MAC387免疫荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5)生长方式：圆形，不规则细胞，贴壁培养。

四、产品的运输和保存
视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80的条件下保存1个月。
2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
推荐培养基：永生化小鼠骨髓源巨噬细胞专用培养基

五、小鼠骨髓来源巨噬细胞接受后处理
1) 收到非红系有核细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2) 请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的*培养基。
4) 如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的*培养基。
5) 接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

六、小鼠骨髓来源巨噬细胞培养操作
1）复苏细胞：将含有细胞悬液的冻存管在 37水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面 T25 瓶为类；
1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2、4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

七、小鼠骨髓来源巨噬细胞培养注意事项
1、收到非红系有核细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件*。若由于培养条件不*而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
3、用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4、静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待ATCC CRL-1711(Sf9)细胞汇合度 80%左右时正常传代。
5、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6、建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7、该细胞仅供科研使用。

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