百欧博伟生物：常用培养基和无菌水的制备是微生物学、细胞生物学等实验的基础工作。以下是几种最常用培养基（以液体和固体形式为主）以及无菌水的标准制备流程和关键注意事项：
一、常用培养基制备
核心原则：准确称量 -> 完全溶解 -> 正确调节pH -> 彻底灭菌 -> 无菌操作分装/倾倒。
1、LB 培养基 (Luria-Bertani Broth/Agar)
用途：最常用的大肠杆菌等细菌培养。
配方 (1L):
胰蛋白胨：10g
酵母提取物：5g
氯化钠：10g
去离子水：定容至1L
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百欧博伟生物：常用培养基和无菌水的制备是微生物学、细胞生物学等实验的基础工作。以下是几种最常用培养基（以液体和固体形式为主）以及无菌水的标准制备流程和关键注意事项：
一、常用培养基制备
核心原则：准确称量 -> 完全溶解 -> 正确调节pH -> 彻底灭菌 -> 无菌操作分装/倾倒。
1、LB 培养基 (Luria-Bertani Broth/Agar)
用途：最常用的大肠杆菌等细菌培养。
配方 (1L):
胰蛋白胨：10g
酵母提取物：5g
氯化钠：10g
去离子水：定容至1L
(固体LB培养基添加：琼脂粉 15g)
制备步骤:
称量溶解：在烧杯或锥形瓶中加入约800mL去离子水。依次准确称取胰蛋白胨、酵母提取物、氯化钠加入水中。用磁力搅拌器或玻璃棒搅拌至完全溶解。(制备固体LB：此时加入琼脂粉)。
定容：用去离子水将溶液定容至1L。
pH调节：LB培养基通常无需调节pH (约为7.0-7.2)。如需精确，用1M NaOH或1M HCl调节pH至7.0。(注意：调节pH应在加入琼脂粉之前进行更准确)。
分装：
液体LB：将溶液分装到带盖的试管或锥形瓶中（液体体积不超过容器容积的1/2 - 2/3，防止灭菌时沸腾溢出）。
固体LB：含有琼脂的溶液通常直接在大锥形瓶中灭菌，以便后续倾倒平板。
灭菌：使用高压蒸汽灭菌锅，121°C (15 psi / 1.05 kg/cm²) 灭菌15-20分钟。确保达到温度并保持足够时间。
冷却与储存：
液体LB：灭菌后取出，室温或冷水浴冷却。短期使用可室温存放，长期应4°C冷藏。
固体LB：灭菌后取出，在超净台或洁净环境中冷却至约50-60°C（手感烫但能短暂握住）。此时加入抗生素或其他热敏感添加剂（摇匀），然后迅速倾倒至无菌培养皿中（约15-20mL/90mm皿）。待琼脂完全凝固后，倒置平板，4°C冷藏保存（用前提前平衡至室温）。
2、NA 培养基 (Nutrient Agar/Broth)
用途：广谱细菌培养，适用于营养要求不苛刻的细菌。
配方 (1L):
牛肉膏：3g
蛋白胨：5g
氯化钠：5g (有时可省略)
去离子水：定容至1L
(固体NA培养基添加：琼脂粉 15g)
制备步骤: 同LB培养基步骤（称量溶解 -> 定容 -> pH调节至7.0-7.2 -> 分装 -> 灭菌121°C 15-20分钟 -> 冷却/倾倒平板 -> 储存）。
3、TSA 培养基 (Tryptic Soy Agar/Broth)
用途：更广谱的细菌培养，支持更多种类的细菌生长（包括一些苛养菌），也常用于环境监测。
配方 (1L): 通常购买商品化干粉。按说明书比例称量（例如：胰蛋白胨15g，大豆蛋白胨5g，氯化钠5g，琼脂15g（固体））。
制备步骤: 同LB培养基步骤（溶解干粉 -> 定容 -> 通常无需调pH -> 分装 -> 灭菌121°C 15分钟 -> 冷却/倾倒平板 -> 储存）。
4、PDA 培养基 (Potato Dextrose Agar/Broth)
用途：主要用于真菌（霉菌、酵母）的培养。
配方 (1L):
马铃薯浸粉：4g (或新鲜马铃薯200g切片煮沸30分钟，过滤取汁)
葡萄糖：20g
琼脂粉：15g (固体)
去离子水：定容至1L
(可选：调节pH至自然或5.6±0.2，可添加氯霉素抑制细菌)
制备步骤:
溶解/浸提：用去离子水溶解马铃薯浸粉（或取马铃薯滤汁）。加入葡萄糖搅拌溶解。(固体加入琼脂粉)。
定容：定容至1L。
pH调节 (可选)：通常天然pH即可，如需精确可用稀HCl调节至约5.6。
分装与灭菌：分装，115°C (10 psi / 0.7 kg/cm²) 灭菌15-20分钟。葡萄糖在121°C下易焦化，故降低灭菌温度。
冷却与储存：同固体LB培养基冷却倾倒步骤。倒置平板4°C保存。
二、无菌水的制备
用途：样品稀释、试剂配制、仪器冲洗等需要无菌条件的操作。
制备步骤:
容器准备：选择耐高压的玻璃瓶（如带螺旋盖的试剂瓶、锥形瓶）或带盖试管。彻底清洗干净。
加水：加入所需体积的去离子水或蒸馏水（推荐去离子水）。液体体积不超过容器容积的2/3。
封口：用耐高压的瓶盖、封口膜或棉塞+牛皮纸/锡箔纸封好瓶口。试管用配套的试管帽或棉塞+牛皮纸套封好。
灭菌：放入高压蒸汽灭菌锅，121°C (15 psi) 灭菌20-30分钟。确保水充分沸腾达到灭菌效果。
冷却与储存：灭菌后取出，在洁净区域（最好在超净台内）冷却至室温。标记好制备日期。通常建议室温避光保存，避免冷藏导致空气中的水蒸气在瓶内壁冷凝增加污染风险。使用前检查是否有沉淀或浑浊。最好现配现用或短期保存。
三、关键注意事项
无菌操作：培养基和无菌水灭菌后，所有操作（分装、倾倒平板、取样）都必须在超净工作台内进行，并严格遵守无菌操作规程（酒精灯火焰旁、灼烧瓶口/管口、穿戴实验服手套等）。
准确称量：使用精确的天平称量各组分，确保培养基成分比例正确。
完全溶解：确保所有固体成分（特别是琼脂粉）在灭菌前完全溶解，避免局部浓度过高或灭菌不彻底。
pH调节：使用校准过的pH计进行调节。调节后最好再重新测量一次。注意调节pH时的温度（通常室温即可）。
灭菌彻底：
确保高压灭菌锅达到规定温度和压力，并保持足够的时间（从达到目标温度开始计时）。
物品摆放要留有蒸汽流通的空间，避免“灭菌死角”。
定期对灭菌锅进行验证（使用生物指示剂或化学指示条）。
防止过热/焦化：含糖培养基采用较低温度灭菌（115°C）。琼脂培养基灭菌后需冷却至合适温度（50-60°C）再倾倒，温度过高产生过多水蒸气，温度过低则凝固无法倾倒。
防止污染：
倾倒平板时，培养皿盖开启角度尽量小。
无菌水开启后应尽快用完，避免反复开启。
所有灭菌后的物品都要清晰标记名称、日期。
使用前检查培养基和无菌水是否有浑浊、沉淀、干裂、异味等污染迹象。
安全第一：
操作高压灭菌锅前必须经过培训，严格遵守操作规程，注意高温高压蒸汽的危险。
倾倒热琼脂时小心烫伤。
穿戴合适的个人防护装备（实验服、手套、护目镜）。
严格按照这些规程操作，是获得可靠实验结果的基础。务必在实验前查阅具体菌种或实验要求的官方推荐培养基配方和制备方法。
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