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人结肠癌细胞荧光素酶标记的检测与应用及注意事项!

2026-01-08 15:17阅读:
人结肠癌细胞荧光素酶标记的检测与应用及注意事项!



人结肠癌细胞荧光素酶标记是将荧光素酶(Luciferase)基因通过基因转染技术导入细胞,使其稳定表达。当加入特定底物时,细胞会产生可检测的生物发光,广泛用于活体成像、药物筛选等研究。

核心标记方法(慢病毒介导法)

这是目前主流且成功率最高的方法,适用于构建稳定表达的细胞系。

载体构建:选择含荧光素酶基因(常用萤火虫荧光素酶 FLuc)和抗性筛选基因的慢病毒载体。

病毒包装:将载体与辅助质粒共转染到包装细胞中,收集并浓缩病毒液。

细胞感染:将病毒液加入处于对数生长期的人结肠癌细胞培养液中,孵育感染。

筛选与验证:用对应抗生素筛选阳性细胞克隆。通过检测发光强度,挑选高活性、稳定表达的单克隆细胞株。

扩大培养:对验证合格的细胞进行扩大培养和冻存,用于后续实验。

关键检测与应用

活性检测:向细胞中加入 D - 荧光素底物,使用酶标仪或活体成像系统检测发光信号,其强度与细胞数量或活力正相关。

主要应用:活体成像(追踪肿瘤生长、转移)、药物筛选(评估药物对肿瘤细胞的杀伤效果)、细胞增殖与凋亡研究等。

注意事项

实验安全:病毒操作需在相应生物安全等级的实验室中进行。

稳定性监测:长期传代后,荧光素酶的表达可能减弱,需定期检测发光活性。

底物选择:萤火虫荧光素酶常用底物为 D - 荧光素,海肾荧光素酶常用腔肠素,不可混用。

对照设置:实验中需设置未标记的亲本细胞作为阴性对照,以排除背景干扰。

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