人结肠癌细胞荧光素酶标记是将荧光素酶(Luciferase)基因通过基因转染技术导入细胞,使其稳定表达。当加入特定底物时,细胞会产生可检测的生物发光,广泛用于活体成像、药物筛选等研究。
核心标记方法(慢病毒介导法)
这是目前主流且成功率最高的方法,适用于构建稳定表达的细胞系。
载体构建:选择含荧光素酶基因(常用萤火虫荧光素酶 FLuc)和抗性筛选基因的慢病毒载体。
病毒包装:将载体与辅助质粒共转染到包装细胞中,收集并浓缩病毒液。
细胞感染:将病毒液加入处于对数生长期的人结肠癌细胞培养液中,孵育感染。
筛选与验证:用对应抗生素筛选阳性细胞克隆。通过检测发光强度,挑选高活性、稳定表达的单克隆细胞株。
扩大培养:对验证合格的细胞进行扩大培养和冻存,用于后续实验。
关键检测与应用
