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营养琼脂培养基的成分组成与主要特点及制备方法!

2026-01-19 15:22阅读:
营养琼脂培养基的成分组成与主要特点及制备方法!



营养琼脂培养基Nutrient Agar,NA)是微生物学实验室中最常用的基础培养基之一,主要用于细菌的分离、培养、计数和保存,尤其适用于营养要求不高的需氧或兼性厌氧细菌(如大肠杆菌葡萄球菌枯草杆菌等)。

一、成分组成(典型配方)

营养琼脂的成分简单,主要提供细菌生长所需的碳源、氮
源、维生素和矿物质,配方如下(每升):

蛋白胨:5g(提供氮源、氨基酸和维生素)

牛肉膏:3g(提供碳源、维生素和矿物质)

氯化钠(NaCl):5g(维持渗透压)

琼脂:15g(凝固剂,不提供营养)

蒸馏水:1000mL(溶剂)

pH 值:调至 7.2±0.2(适合多数细菌生长)

二、主要特点

通用性强:成分简单,营养中等,能满足大多数非苛养菌(营养要求不高的细菌)的生长需求,是细菌培养的“基础款”。

物理状态:加入琼脂后呈固体状态(常温下凝固),便于细菌形成单个菌落,用于分离纯化或计数。

用途广泛:可直接使用,也可作为基础培养基添加其他成分(如血液、糖、抗生素等)制成特殊培养基(如血琼脂、选择培养基)。

三、制备方法

按配方称取各成分,加入蒸馏水中,加热搅拌至完全溶解。

调整 pH 至 7.2±0.2(可通过盐酸或氢氧化钠调节)。

分装到锥形瓶或试管中,121高压蒸汽灭菌 20 分钟(杀灭杂菌,同时使琼脂彻底融化)。

灭菌后冷却至 50-60(避免温度过高杀死接种的细菌),可直接倾倒平板(制成平皿)或分装试管(制成斜面),凝固后备用。

四、主要用途

细菌分离与纯化:将含菌样本(如土壤、水、分泌物)接种到营养琼脂平板,通过划线法获得单个菌落,用于纯培养。

菌落计数:对水样、食品等样本进行梯度稀释后接种,计数菌落数(CFU/g 或 CFU/mL),估算活菌数量。

细菌保存:将纯培养的细菌接种到营养琼脂斜面,培养后 4冷藏,可短期保存菌种(一般 1-3 个月)。

基础培养基改造:例如:

加入 5%-10% 脱纤维羊血,制成血琼脂培养基(用于培养链球菌、肺炎克雷伯菌等,观察溶血现象);

加入特定抗生素(如青霉素),制成选择培养基(筛选耐药菌)。

五、局限性

无法培养苛养菌(营养要求高的细菌):如流感嗜血杆菌(需要 X、V 因子)、脑膜炎奈瑟菌(需要巧克力琼脂)等,在营养琼脂上不生长或生长不良。

不适用于厌氧菌和真菌:营养琼脂为有氧环境,厌氧菌需在厌氧条件下培养;真菌(如酵母菌、霉菌)通常需要更丰富的培养基。

六、总结

营养琼脂是微生物实验室的“基础培养基”,凭借简单的成分和广泛的适用性,成为细菌培养、分离和计数的常用工具,尤其适合初学者或常规细菌学检测。但需注意,它不能满足所有微生物的生长需求,需根据目标菌的营养特性选择合适的培养基。

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