猪原代主动脉平滑肌细胞的实验研究需围绕细胞纯度维持、表型稳定性、实验重复性三大核心目标,以下是分模块的详细注意事项:
一、细胞分离与培养阶段注意事项
1、取材与无菌操作
取材猪需健康无心血管疾病,尽量选择幼年猪(细胞增殖能力更强),取材部位为胸主动脉或腹主动脉,避免靠近分支处(易混杂其他细胞)。
全程严格无菌操作,解剖器械需高压灭菌或无菌处理,取材过程中用含双抗(青霉素 + 链霉素)的 PBS 反复冲洗血管表面,去除血液和脂肪组织。
2、纯度控制关键步骤
剥离血管外膜(含成纤维细胞)和内膜(含内皮细胞)时需彻底,仅保留富含平滑肌的中膜层;若采用酶消化法,需优化胶原酶浓度(通常 0.1%~0.2%)和消化时间(37 30~60min),避免过度消化导致细胞损伤。
