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全血基因组提取的准备工作与操作步骤及注意事项有哪些？

2026-01-28 15:00阅读：

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全血基因组提取的准备工作与操作步骤及注意事项有哪些？


百欧博伟生物：全血基因组DNA提取需抗凝全血、裂解液等材料，经样本处理、细胞裂解、DNA释放纯化、洗脱收集及浓度测定等步骤，注意无菌操作、离心条件及试剂盒说明书，确保提取效果和准确性。

全血基因组DNA提取的操作步骤可以归纳为以下详细流程，但请注意，不同实验室或试剂盒可能会有所差异，以下步骤提供了一种常见的方法：

一、材料准备

1、抗凝全血样本

2、细胞裂解液

3、Proteinase K溶液

4、缓冲液（如GB、GD、PW等，具体名称可能因试剂盒不同而异）

5、吸附柱及收集管

6、洗脱缓冲液

7、离心管（如1.5ml、15ml等）

8、移液器及吸头

9、涡旋振荡器

10、离心机

11、水浴锅

12、冰盒

二、操作步骤

1、样本处理：

取适量抗凝全血（如1ml）放入15ml离心管中。

如需处理更大体积血液，可加入3倍体积红细胞裂解液，颠倒混匀后室温放置，再离心去除上清，留下白细胞沉淀。

2、细胞裂解：

将处理后的血液或白细胞沉淀加入细胞裂解液，颠倒混匀。

加入Proteinase K溶液，混匀后置于水浴锅中进行裂解反应，期间需颠倒混匀数次。

3、DNA释放与纯化：

加入缓冲液GB（或其他相应缓冲液），充分颠倒混匀后置于水浴锅中。

加入无水乙醇或异丙醇，混匀后出现絮状沉淀。

将溶液和沉淀转移至吸附柱中，离心去除废液。

向吸附柱中加入漂洗液，离心后弃去废液，重复此步骤一次或多次。

将吸附柱空离一次，以彻底去除残余漂洗液。

4、DNA洗脱与收集：

将吸附柱移至干净的离心管中。

向吸附膜中间位置悬空滴加洗脱缓冲液，室温放置一段时间后离心收集DNA溶液。

如需增加DNA得率，可将离心得到的溶液再次加入吸附柱中，重复洗脱步骤。

5、DNA浓度测定与保存：

使用分光光度计测定DNA浓度和纯度。

将DNA溶液保存于-20冰箱中，以防降解。

三、注意事项

1、在操作过程中应严格遵循无菌原则，避免DNA污染。

2、离心时应注意转速和时间，避免DNA损失。

3、不同试剂盒的缓冲液成分和比例可能有所不同，应严格按照说明书进行操作。

4、在进行DNA洗脱时，洗脱缓冲液的体积和pH值对洗脱效率有很大影响，应选择合适的洗脱条件。

以上步骤提供了一种全血基因组DNA提取的常规方法，但具体步骤可能因实验室条件和试剂盒的不同而有所调整。在实际操作中，应严格遵循所用试剂盒的说明书进行操作，以确保提取效果和实验结果的准确性。

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