流感嗜血杆菌的培养和鉴定需要注意的相关事项有哪些？
2026-01-29 15:24阅读：
流感嗜血杆菌的培养和鉴定需要注意的相关事项有哪些？
流感嗜血杆菌的培养和鉴定过程中，由于其对营养要求特殊、形态及生化特性有一定特异性，需注意以下关键事项，以确保结果的准确性和可靠性：
一、培养相关注意事项
1、营养条件的严格控制
流感嗜血杆菌生长依赖 X 因子（血红素及其衍生物） 和 V
因子（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD），因此必须使用含这两种因子的培养基，巧克力琼脂平板是首选（通过加热破坏红细胞释放 X 因子，并使
V 因子更易利用）。
避免使用普通血平板（未经加热的血平板中，红细胞的 V 因子可能被破坏，且
X 因子释放不足，导致细菌生长不良）。
若进行液体培养，可在肉汤中添加裂解红细胞或补充
X、V 因子（如加入亚硫酸钠处理的血或商业因子添加剂）。
2、培养环境的优化
需氧或兼性厌氧，培养时需保持一定湿度（可在孵箱内放置水盘），避免培养基干燥影响生长。
最适温度为 35~37，pH
7.6~7.8，温度过高（>38.5）或过低（<35）会抑制生长。
部分菌株可能需要 5%~10%
CO环境（尤其初代培养），可促进其生长（如脑膜炎患者的脑脊液标本）。
3、标本处理与接种时机
标本采集后需 立即送检，尤其是脑脊液、血液等易污染或细菌易死亡的标本，避免长时间放置导致细菌活力下降（流感嗜血杆菌对干燥、低温敏感）。
血液标本需先接种于血培养瓶（含 X、V
因子或促生长因子），经增菌培养后再转种至巧克力琼脂；脑脊液标本离心后取沉淀物接种，提高检出率。
接种量需适当，避免标本中杂菌过度生长抑制流感嗜血杆菌（如呼吸道标本中可能含大量其他细菌，需选择性培养时可加入万古霉素等抑制革兰氏阳性菌）。
4、培养时间的把控
初代培养需观察 24~48 小时，部分缓慢生长菌株可能需要延长至 72
小时，避免因培养时间不足而漏检（早期菌落可能极小，易被忽略）。
二、鉴定相关注意事项
1、形态学观察的准确性
革兰氏染色时需注意：流感嗜血杆菌为革兰氏阴性短小杆菌，但在陈旧培养物或脓性标本中可能呈多形性（球杆状、长丝状），易与其他革兰氏阴性杆菌混淆，需结合培养特性综合判断。
荚膜染色仅对有荚膜菌株有效，无荚膜菌株（如非分型株）可能不显色，不可仅凭荚膜有无排除诊断。
2、卫星现象试验的规范操作
卫星现象是流感嗜血杆菌的特征性试验，但需注意：
需使用
金黄色葡萄球菌 作为 V 因子提供者（其产生的 V 因子可扩散至培养基中），其他细菌可能不产生足够 V
因子，导致试验假阴性。
接种时需将待检菌与金黄色葡萄球菌划线距离适当（约
5~10mm），过近可能因葡萄球菌过度生长抑制待检菌，过远则 V 因子扩散不足，影响结果。
需在血平板上进行（巧克力平板中已含 V
因子，可能干扰试验）。
3、生化反应的选择与判断
基础生化反应包括：发酵葡萄糖（产酸不产气）、不发酵乳糖、氧化酶阳性、触酶阳性（部分菌株），这些是与其他革兰氏阴性杆菌（如副流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌）鉴别的关键。
注意：少数菌株可能生化反应不典型（如迟缓发酵葡萄糖），需结合其他试验（如卫星现象、因子需求试验）确认。
4、血清型鉴定的局限性
仅对有荚膜菌株（a~f
型）有效，非分型株（无荚膜）无法通过血清型鉴定，需结合分子生物学方法（如 PCR 检测荚膜基因）区分。
乳胶凝集试验检测 Hib
荚膜抗原时，需注意标本中可能存在的交叉反应物质（如其他细菌的多糖抗原），必要时用阴性对照验证。
5、耐药菌株的影响
若标本来自已使用抗生素的患者，细菌可能因受抑制而生长不良，导致培养或鉴定困难，需结合抗原检测或分子生物学方法（如
PCR）辅助诊断。
鉴定时需同时进行药敏试验，尤其注意产 β- 内酰胺酶菌株（对氨苄西林耐药），避免因表型改变影响鉴定结果。
三、其他通用注意事项
污染控制：操作需在无菌环境中进行，避免杂菌污染（尤其是葡萄球菌、奈瑟菌等，可能与流感嗜血杆菌形态或培养特性相似）。
质量控制：每次试验需同时接种标准菌株（如流感嗜血杆菌 ATCC
10211）作为阳性对照，确保培养基、试剂有效。
通过严格把控上述环节，可提高流感嗜血杆菌培养和鉴定的准确性，为临床诊断和治疗提供可靠依据。
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