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微生物检测中常见稀释液的类型与选择原则及适用场景!

2026-02-03 15:02阅读:
微生物检测中常见稀释液的类型与选择原则及适用场景!



百欧博伟生物:在微生物检测中,稀释液的选择需根据检测对象(微生物类型)、样品性质以及检测目的来确定,核心目标是:保持微生物活性;避免样品中干扰物质影响微生物生长;保证稀释过程的均一性和准确性。以下是常见的稀释液类型及选择原则:

一、常用稀释液类型及适用场景

1、生理盐水(0.85% NaCl 溶液)

最常用的稀释液,适用于大多数非苛养菌(如大肠杆菌葡萄球菌等)。

优点:渗透压与微生物细胞接近,可防止细胞因渗透作用破裂或皱缩,维持细胞活性。

局限性:对含高浓度有机物
、防腐剂或抑菌成分的样品,稀释效果可能不佳(无法中和抑菌作用)。

2、磷酸盐缓冲液(PBS)

由磷酸钠、氯化钠等组成,具有稳定的 pH 缓冲能力(通常 pH 7.2~7.4)。

适用场景:

样品本身 pH 波动较大(如酸性食品、碱性废水),需维持稀释体系 pH 稳定时;

用于需要长期保存稀释样品(短时间内)或对 pH 敏感的微生物(如某些乳酸菌)。

胰蛋白胨生理盐水(TPS,0.1% 胰蛋白胨 + 0.85% NaCl)

在生理盐水中添加少量胰蛋白胨(提供营养),可轻微修复受损微生物,延长其存活时间。

适用场景:样品中微生物可能因环境胁迫(如干燥、低温)受损时(如土壤、干燥食品中的微生物)。

3、中和性稀释液

针对含抑菌物质的样品,需添加中和剂消除干扰,常见类型:

卵磷脂 - 吐温 80 溶液:中和表面活性剂(如化妆品、洗涤剂中的去污剂)对细菌的抑制作用;

硫代硫酸钠溶液:中和样品中的氯(如消毒后的水体、餐具样品);

亚硫酸钠溶液:中和甲醛等醛类防腐剂(如某些加工食品);

疱肉培养基稀释液:用于含抗生素或抑菌成分的样品(如药物残留的样品)。

4、其他特殊稀释液

蒸馏水 / 去离子水:仅适用于对渗透压不敏感的微生物(如芽孢杆菌的芽孢),或样品本身含高浓度盐需低渗稀释时,慎用(可能导致大多数细菌细胞破裂)。

营养肉汤稀释液:含少量营养成分,适用于苛养菌(如链球菌、嗜血杆菌)的稀释,但需注意避免过度繁殖(仅用于短时间稀释)。

二、选择稀释液的核心原则

1、匹配微生物类型:

苛养菌(如乳酸菌、双歧杆菌)需温和的稀释液(如 PBS 或含少量营养的稀释液),避免渗透压剧烈变化;

芽孢、真菌孢子可耐受较宽渗透压,生理盐水或蒸馏水均可,但真菌更适合用含少量葡萄糖的稀释液(如 0.5% 葡萄糖生理盐水)。

2、消除样品干扰:

样品含抑菌物质(防腐剂、消毒剂、高盐 / 高糖、抗生素)时,必须使用中和性稀释液(如含中和剂的 PBS 或生理盐水),否则会导致微生物计数偏低。

例:检测含氯消毒后的餐具表面微生物,需用含硫代硫酸钠的稀释液中和余氯。

3、维持体系稳定性:

样品 pH 异常(如泡菜 pH 3~4,碱性废水 pH 10 以上)时,优先选缓冲能力强的稀释液(如 PBS),避免微生物因 pH 过高 / 过低死亡。

4、遵循标准方法:

国标或行业标准中通常明确规定稀释液类型(如食品微生物检测标准),需严格按标准执行(如食品检测常用生理盐水或 TPS,水体检测常用 PBS)。

三、注意事项

稀释液需灭菌(高压蒸汽灭菌 121、15~20 分钟),避免引入杂菌污染。

稀释过程中需保持稀释液温度与样品接近(如室温),避免温差导致微生物应激死亡。

对未知样品,可优先选择生理盐水或 PBS 作为基础稀释液,若怀疑有抑菌成分,需通过预实验验证(如添加中和剂后菌落数是否显著增加)。

通过以上原则,可根据实际样品和微生物特性选择最合适的稀释液,确保检测结果的准确性。

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