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药检中金黄色葡萄球菌检测结果判断的核心依据与判断标准!

2026-02-06 13:54阅读:
药检中金黄色葡萄球菌检测结果判断的核心依据与判断标准!



药检中金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus)的检测结果判断需严格依据《中国药典》(现行版)及相关标准,结合增菌培养、分离鉴别、生化反应及对照试验的结果综合判定,具体标准如下:

一、结果判断的核心依据

检测流程需依次通过增菌培养、分离培养、形态学观察、生化试验四个关键环节,且阳性对照和阴性对照必须符合要求,否则试验结果无效。

二、分步结果判断标准

1、增菌培养结果初筛

增菌培养基:7.5% 氯化钠肉汤或亚碲酸钠肉汤(30~35培养 18~24 小时,必要时延长至 48 小时)。

判断:若增菌液出现混浊(提示可能有菌生长),需进行下一步分离培养;若增菌液澄清(无明显生长),需结合对照试验进一步确认(如阳性对照生长正常,可初步判定供试品未检出)。

>2、分离培养结果鉴别

选择培养基:甘露醇氯化钠琼脂(MSA)或血琼脂培养基(30~35培养 18~24 小时)。

典型菌落特征:

MSA 培养基:菌落圆形、凸起、边缘整齐、表面光滑,直径 1~2mm,因发酵甘露醇产酸,菌落周围培养基呈黄色(与不发酵甘露醇的表皮葡萄球菌等区分)。

血琼脂培养基:菌落呈金黄色、圆形、凸起,周围出现 β- 溶血环(完全透明的溶血区)。

判断:若出现上述典型菌落,进入生化鉴定;若无菌落生长或菌落不符合典型特征,需结合后续试验排除。

3、生化试验结果确认(关键判定指标)

1)革兰染色与镜检

结果:革兰阳性球菌,呈葡萄串状排列(无芽胞,无鞭毛)。

排除:若为革兰阴性菌或链状排列的球菌(如链球菌),可排除。

2)凝固酶试验(必做,金标准)

方法:取可疑菌落接种于兔血浆中,37培养 3~4 小时(最长不超过 24 小时)。

结果:血浆凝固(呈胶冻状,倒置试管不流动)为阳性;未凝固为阴性。

意义:金黄色葡萄球菌凝固酶阳性,绝大多数其他葡萄球菌(如表皮葡萄球菌)为阴性,是核心鉴别指标。

3)触酶试验

方法:取菌落滴加 3% 过氧化氢溶液。

结果:产生大量气泡(阳性)。

意义:区分葡萄球菌(阳性)与链球菌(阴性)。

4)甘露醇发酵试验

结果:在甘露醇氯化钠培养基中发酵甘露醇产酸,使培养基 pH 降低,指示剂变色(如酚红由红变黄)。

4、对照试验结果要求

阳性对照:金黄色葡萄球菌标准菌株(如 ATCC 25923)在增菌、分离及生化试验中均应生长并符合典型特征(如凝固酶阳性),确保试验系统有效。

阴性对照:稀释剂、培养基空白及阴性对照菌(如表皮葡萄球菌)应无相应阳性反应(如凝固酶阴性),排除污染或试剂干扰。

三、最终结果判定

1、检出金黄色葡萄球菌

满足以下全部条件:

增菌液混浊,分离培养出现典型菌落(MSA 黄色菌落或血琼脂 β- 溶血环);

革兰染色为葡萄串状革兰阳性球菌;

凝固酶试验阳性;

触酶试验阳性;

阳性对照正常生长,阴性对照无干扰。

2、未检出金黄色葡萄球菌

符合以下任一条件(且对照试验有效):

增菌液澄清,分离培养无典型菌落;

虽有菌落生长,但革兰染色、凝固酶试验等关键指标不符合(如凝固酶阴性);

生化试验结果与典型特征不一致,且经进一步验证(如耐热核酸酶试验阴性)确认非目标菌。

四、注意事项

若出现“非典型菌落 + 部分生化阳性”(如凝固酶弱阳性),需通过补充试验(如耐热核酸酶试验、SPA 检测或 PCR 扩增 nuc 基因)进一步确认,避免漏判或误判。

试验过程需严格无菌操作,防止交叉污染导致假阳性;若对照试验失败,需重新检测。

以上标准确保了金黄色葡萄球菌检测的特异性和准确性,符合药品微生物质量控制的严格要求。

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