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检查目镜测微尺和镜台测微尺是否完好，无划痕或刻度模糊。
取下显微镜目镜，将目镜测微尺的刻度面朝下（确保观察时能清晰看到刻度），放入目镜的视场光阑处，再重新装回目镜。
将镜台测微尺的刻度面朝上，放在显微镜载物台中央，用压片夹固定。
二、核心步骤：镜台测微尺校准目镜测微尺
校准的目的是确定不同放大倍数下，目镜测微尺每一小格对应的实际长度（μm），这是后续测量细胞大小的关键前提。
1、低倍镜（10× 物镜）校准
打开显微镜光源，调节粗准焦螺旋和细准焦螺旋，使镜台测微尺的刻度清晰成像。
移动载物台，使镜台测微尺的某一刻度线与目镜测微尺的某一刻度线完全重合（作为起始点）。
沿刻度方向观察，找到两组刻度线再次完全重合的位置（作为终点），分别记录：
目镜测微尺重合区间的格数（记为 A）
镜台测微尺重合区间的格数（记为 B）
计算低倍镜下目镜测微尺每小格实际长度：
目镜每小格长度（μm）=（B×10μm）÷A
（注：镜台测微尺每小格固定为 10μm，总长 1mm=100 小格）
2、高倍镜（40× 物镜）与油镜（100× 物镜）校准
高倍镜校准：将物镜切换至 40×，重复低倍镜校准的步骤 2-4，计算高倍镜下目镜测微尺每小格的实际长度。
（注意：切换物镜后需重新调节细准焦螺旋，确保刻度清晰，不可调节粗准焦螺旋，避免压坏镜头和测微尺）
油镜校准：在镜台测微尺刻度面中央滴一滴香柏油，切换至 100× 油镜，同样重复步骤 2-4，计算油镜下的刻度换算值。
（油镜观察后，需立即用擦镜纸蘸少量二甲苯擦拭镜头，再用干净擦镜纸擦净残留二甲苯）
三、微生物细胞大小测量
1、样品制备
取干净载玻片，用无菌滴管吸取少量稀释后的微生物样品，滴在载玻片中央（约 1-2 滴，避免过多溢出）。
用镊子夹取盖玻片，从样品一侧缓慢盖上（避免产生气泡，气泡会影响观察和测量），制成压片。
2、细胞观察与测量
将样品压片放在载物台中央，先通过低倍镜找到清晰的细胞，再切换至高倍镜或油镜（细菌需用油镜，酵母菌用高倍镜即可）。
选取视野中形态完整、无重叠的细胞（至少 10-20 个，保证数据代表性），分别测量：
球菌：测量其直径（目镜测微尺覆盖的格数）
杆菌：测量其长度和宽度（分别记录对应的格数）
记录每个细胞对应的目镜测微尺格数，结合校准好的“目镜每小格实际长度”，计算细胞的实际大小：
细胞实际大小（μm）= 目镜测微尺格数 × 目镜每小格实际长度
3、数据处理
统计所有测量细胞的大小数据，计算平均值（如杆菌的平均长度、平均宽度）。
记录不同放大倍数下的校准值和测量结果，整理成实验表格，确保数据可追溯。
四、实验后整理与注意事项
1、仪器清洁与整理
取下镜台测微尺，用清水冲洗干净后晾干；目镜测微尺可留在目镜中，或取出后放入专用盒保存。
清洁显微镜：用擦镜纸擦拭物镜和目镜，载物台用湿纱布擦净，关闭光源，将显微镜归位。
2、关键注意事项
校准必须针对每个物镜单独进行，不同放大倍数的校准值不可通用。
测量细胞时，若视野中细胞重叠或变形，需更换视野重新选取，避免数据误差。
油镜使用时，香柏油需滴在镜台测微尺或样品的正中央，且观察后必须立即清洁，防止镜头被腐蚀。
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