根癌农杆菌感受态细胞是经低温与化学/电穿孔处理、能高效摄取外源质粒的细胞，是植物遗传转化的关键起始材料；通常与双元载体配合，由 Vir 区协助 TDNA 转入植物基因组，实现稳定表达或编辑。
常用菌株与选型（简表）
菌株
GV3101
LBA4404 Ach5，pAL4404（TiΔTDNA）
AGL1
新浪博客
根癌农杆菌感受态细胞是经低温与化学/电穿孔处理、能高效摄取外源质粒的细胞，是植物遗传转化的关键起始材料；通常与双元载体配合，由 Vir 区协助 TDNA 转入植物基因组，实现稳定表达或编辑。
常用菌株与选型（简表）
菌株
GV3101
LBA4404 Ach5，pAL4404（TiΔTDNA）
AGL1
C58 RecA，pTiBo542（TiΔTDNA）
制备与转化（核心流程）
化学法（CaCl）：28培养至 OD≈0.5；冰浴冷却→离心收集→预冷 0.02 mol/L CaCl重悬→分装；加质粒冰浴→热激（37/42，90 秒）→冰浴→复苏→抗性平板筛选；适合常规小质粒，成本低、操作简单，效率中等；-80甘油冻存可长期保存。
电转化：用预冷无菌水/10% 甘油洗涤至低电导；分装冻存；冰浴融化→加质粒→电穿孔（约 2.5 kV，200 Ω，25 μF）→立即加复苏液→28振荡复苏→筛选；适合大质粒、高拷贝或难转化载体，效率更高、重复性好，需电穿孔仪与无盐体系。
关键要点与避坑
全程低温（冰浴）、无菌操作，避免 DNA 酶污染与温度波动；质粒需高纯度、无乙醇/盐残留。
抗性筛选需匹配：农杆菌自身抗性（Rif/Gent/Str 等）与载体抗性（Kan/Carb 等）不可冲突；平板与复苏液的抗生素浓度按说明书或预实验确定。
转化后 28振荡复苏 2–4 小时，让抗性基因表达；挑单克隆摇菌，用菌落 PCR 或提质粒酶切验证阳性克隆。
冻存与复苏：-80甘油冻存，避免反复冻融；复苏时冰浴缓慢融化，立即使用。
应用与后续步骤
构建含目的基因的双元载体。
转化感受态→筛选阳性农杆菌→扩大培养并制备侵染液。
介导转化：叶盘法、浸花法、愈伤侵染等；共培养后脱菌、筛选抗性植株。
分子鉴定：PCR、Western blot、荧光观察等，确认整合与表达。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！
制备与转化（核心流程）
化学法（CaCl）：28培养至 OD≈0.5；冰浴冷却→离心收集→预冷 0.02 mol/L CaCl重悬→分装；加质粒冰浴→热激（37/42，90 秒）→冰浴→复苏→抗性平板筛选；适合常规小质粒，成本低、操作简单，效率中等；-80甘油冻存可长期保存。
电转化：用预冷无菌水/10% 甘油洗涤至低电导；分装冻存；冰浴融化→加质粒→电穿孔（约 2.5 kV，200 Ω，25 μF）→立即加复苏液→28振荡复苏→筛选；适合大质粒、高拷贝或难转化载体，效率更高、重复性好，需电穿孔仪与无盐体系。
关键要点与避坑
全程低温（冰浴）、无菌操作，避免 DNA 酶污染与温度波动；质粒需高纯度、无乙醇/盐残留。
抗性筛选需匹配：农杆菌自身抗性（Rif/Gent/Str 等）与载体抗性（Kan/Carb 等）不可冲突；平板与复苏液的抗生素浓度按说明书或预实验确定。
转化后 28振荡复苏 2–4 小时，让抗性基因表达；挑单克隆摇菌，用菌落 PCR 或提质粒酶切验证阳性克隆。
冻存与复苏：-80甘油冻存，避免反复冻融；复苏时冰浴缓慢融化，立即使用。
应用与后续步骤
构建含目的基因的双元载体。
转化感受态→筛选阳性农杆菌→扩大培养并制备侵染液。
介导转化：叶盘法、浸花法、愈伤侵染等；共培养后脱菌、筛选抗性植株。
分子鉴定：PCR、Western blot、荧光观察等，确认整合与表达。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！