一、试剂与耗材
0.1% 型胶原酶（用 PBS 或 DMEM 配制）
完全培养基：DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗
PBS、0.25% 胰酶 - EDTA
70 μm 细胞筛网
离心管、培养瓶/皿
二、取材（无菌操作）
麻醉处死大鼠，75% 酒精浸泡消毒。
取腹股沟脂肪垫（最常用、杂质少、产量高），也可选用肾周、附睾脂肪。
PBS 冲洗 2～3 次，剔除血管、筋膜、毛发。
三、胶原酶消化
无菌眼科剪将脂肪剪至碎糜状。
新浪博客
一、试剂与耗材
0.1% 型胶原酶（用 PBS 或 DMEM 配制）
完全培养基：DMEM/F12 + 10% FBS + 1% 双抗
PBS、0.25% 胰酶 - EDTA
70 μm 细胞筛网
离心管、培养瓶/皿
二、取材（无菌操作）
麻醉处死大鼠，75% 酒精浸泡消毒。
取腹股沟脂肪垫（最常用、杂质少、产量高），也可选用肾周、附睾脂肪。
PBS 冲洗 2～3 次，剔除血管、筋膜、毛发。
三、胶原酶消化
无菌眼科剪将脂肪剪至碎糜状。
加入 3～5 倍体积 0.1% 型胶原酶。
37 水浴/摇床振荡消化 20～30 min，至呈浑浊乳状。
四、终止消化与过滤
加入等体积完全培养基终止消化，吹打混匀。
70 μm 滤网过滤，去除未消化组织块。
滤液转入离心管。
五、离心收集 SVF（血管基质组分）
250 g 离心 5 min
弃上清（上层油脂 + 液体），只留底部细胞沉淀
六、重悬接种
完全培养基重悬细胞。
接种至 T25/T75 培养瓶。
置于 37、5% CO、饱和湿度 培养。
七、纯化（关键步骤）
48 h 首次换液：
弃去未贴壁的红细胞、免疫细胞、杂质，只保留贴壁的 ADSCs。
之后每 2～3 天换液一次。
八、传代
细胞融合达 70%～80% 时传代。
PBS 洗 1 次。
加 0.25% 胰酶消化 1～1.5 min，显微镜下见细胞回缩即终止。
传代比例通常 1:2 或 1:3。
九、实验建议代数
P3～P5 代：状态最好、分化能力最强，推荐用于实验。
常见关键点（避坑）
脂肪一定要去血管、去筋膜，否则杂质多、难纯化。
胶原酶消化不要超过 40 min，否则细胞状态差。
首次换液必须48 h，太早会把刚贴壁的干细胞倒掉。
血清质量直接决定细胞长势。
北京百欧博伟生物技术有限公司的微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台，并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网站，自设设备及技术的微生物菌种保藏中心！欢迎广大客户来询！