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TGY琼脂的前期准备与灭菌处理及配制与使用方法！

2026-04-21 15:20阅读：

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TGY琼脂的前期准备与灭菌处理及配制与使用方法！





TGY琼脂是一种常用的细菌培养基，主要成分为胰蛋白胨（Tryptone）、葡萄糖（Glucose）、酵母提取物（Yeast extract），广泛用于细菌的分离、培养和计数等实验，其使用方法需遵循培养基操作的标准流程，具体步骤如下：

一、前期准备

1、试剂与器材准备

核心试剂：TGY 琼脂干粉（按配方比例配置，通常每升蒸馏水对应特定质量的干粉，如常见配方为胰蛋白胨 10g、葡萄糖 5g、酵母提取物 5g、琼脂 15-20g）、蒸馏水。

实验器材：锥形瓶、烧杯、玻璃棒、高压蒸汽灭菌锅、培养皿、无菌移液管、酒精灯、超净工作台等。

辅助用品：标签纸、记号笔、恒温培养箱。

2、实验环境预处理

超净工作台提前 30 分钟开启紫外灯消毒，使用前关闭紫外灯并通风 10-15 分钟；实验台面用 75
% 酒精擦拭消毒。

所有需灭菌的器材（如锥形瓶、移液管、培养皿等）需提前经高压蒸汽灭菌或干热灭菌处理。

二、培养基配制

1、称量与溶解

根据实验所需体积，准确称量 TGY 琼脂干粉置于锥形瓶中，加入对应量的蒸馏水（例如配制 500mL 培养基，需按配方比例减半称量干粉，加入 500mL 蒸馏水）。

用玻璃棒搅拌均匀，必要时可置于水浴锅中加热（40-60），促进干粉充分溶解，避免琼脂结块。

2、调节 pH 值（可选）

若实验对 pH 有特定要求（通常细菌培养适宜 pH 为 7.0-7.4），可在溶解后用 1mol/L HCl 或 1mol/L NaOH 调节 pH，使用 pH 计实时监测。

3、分装与标记

将溶解均匀的培养基分装至锥形瓶中，分装量不超过锥形瓶容积的 1/2，避免灭菌时溢出。

在锥形瓶上贴标签，注明培养基名称（TGY 琼脂）、配制日期、配制人及浓度等信息。

三、灭菌处理

1、高压蒸汽灭菌

将装有培养基的锥形瓶用双层纱布或硅胶塞封口（避免灭菌后污染），放入高压蒸汽灭菌锅。

设定灭菌参数：121、103.4kPa，维持 15-20 分钟（若培养基体积较大，可适当延长灭菌时间，如 2000mL 培养基可延长至 30 分钟）。

2、灭菌后冷却

灭菌结束后，待灭菌锅内压力降至常压、温度降至 100以下时，缓慢打开排气阀，取出锥形瓶。

将锥形瓶置于超净工作台附近，自然冷却至 50-60（手感不烫手为宜，避免温度过高导致培养皿变形，或过低使琼脂凝固无法倒平板）。

四、倒平板操作

1、培养皿准备

取出灭菌后的培养皿，在超净工作台内打开包装，将培养皿倒置摆放（避免灰尘落入）。

2、倒平板流程

在超净工作台内，点燃酒精灯，将锥形瓶瓶口靠近火焰灭菌（旋转灼烧 3-5 秒）。

左手握住培养皿底部，右手持锥形瓶，缓慢将培养基倒入培养皿中，每皿倒入约 15-20mL（确保培养基均匀覆盖皿底，无气泡）。

倒完后迅速盖上培养皿盖，轻轻旋转培养皿，使培养基分布均匀，避免产生气泡。

3、凝固与储存

将倒好的培养皿置于超净工作台内，水平放置，待培养基自然凝固（约 30-60 分钟，避免移动导致表面不平整）。

若暂时不使用，凝固后可将培养皿倒置放入 4冰箱冷藏储存，储存时间不超过 1 周，使用前需提前取出恢复至室温。

五、接种与培养

1、接种操作

依据实验目的选择合适的接种方法，如涂布平板法、划线分离法等。

以涂布平板法为例：在超净工作台内，用无菌移液管吸取 0.1mL 菌液滴加到 TGY 琼脂平板表面，用无菌玻璃涂布棒将菌液均匀涂抹在培养基表面，涂抹时避免用力刮擦培养基。

接种后，在培养皿盖上标记实验信息（菌株名称、接种日期、培养条件等）。

2、恒温培养

将接种后的培养皿倒置放入恒温培养箱中（避免冷凝水滴落污染菌落），根据目标细菌的生长需求设定培养温度和时间，例如多数细菌在 37下培养 18-24 小时，厌氧菌需在厌氧环境下培养。

六、后续观察与处理

1、菌落观察

培养结束后，取出培养皿，观察菌落的形态、大小、颜色、边缘等特征，进行计数或分离纯化。

2、实验后清理

实验结束后，所有使用过的培养基（包括未接种的剩余培养基）需经高压蒸汽灭菌处理后，再进行丢弃或回收，避免环境污染。

实验器材按常规方法清洗、灭菌，备用。

3、注意事项

琼脂干粉溶解时需充分搅拌，避免未溶解的颗粒导致培养基凝固后出现不均一现象。

高压蒸汽灭菌时需确保锅内空气排尽，否则会影响灭菌效果；灭菌后避免快速排气，防止培养基暴沸。

倒平板时温度需控制在 50-60，温度过高易烫伤实验人员，且可能杀死接种的菌液；温度过低则琼脂易凝固，无法顺利倒平板。

接种过程需严格遵循无菌操作规范，避免杂菌污染，影响实验结果。

不同菌株的培养条件（温度、时间、氧气需求等）存在差异，需根据具体菌株调整培养参数。

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