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狗原代肠神经胶质细胞的分离与培养及鉴定方法！

2026-09-10 14:07阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/7058810482

狗原代肠神经胶质细胞的分离与培养及鉴定方法！




武汉百欧博伟生物：关于狗的原代肠神经胶质细胞（Canine Primary Enteric Glial Cells），以下是相关信息和实验要点整理：

一、细胞特性

来源：肠神经胶质细胞（EGCs）是肠神经系统（Enteric Nervous System, ENS）的重要组成部分，分布于肠道各层（黏膜下层、肌间神经丛等）。

功能：调节肠道运动、免疫反应、屏障功能、神经保护，与炎症性肠病（IBD）、肠梗阻等疾病相关。

标志物：GFAP（胶质纤维酸性蛋白）、S100B、Sox10、PLP1 等。

二、原代细胞分
离与培养

实验步骤：

1、组织取材：

安乐死犬后，快速取出肠道（如回肠或结肠），置于预冷的无菌PBS或DMEM/F12培养基中。

去除肠系膜和脂肪组织，纵向切开肠道，用PBS冲洗干净内容物。

2、酶消化：

剪碎肠道组织（约1-2 mm³），用含胶原酶（如Collagenase XI，1-2 mg/ml）、分散酶（Dispase II，1 mg/ml）和DNase I（50 μg/ml）的消化液，37振荡消化30-60分钟。

终止消化后，用细胞筛（70-100 μm）过滤，离心收集细胞。

3、细胞纯化：

通过差速贴壁法去除成纤维细胞（将细胞悬液在培养瓶中预贴壁30分钟，转移未贴壁细胞）。

可选：免疫磁珠分选（如抗S100B或GFAP抗体标记）或流式分选提高纯度。

4、培养基：

常用培养基：DMEM/F12 + 10% FBS + 生长因子（如EGF 20 ng/ml、bFGF 10 ng/ml、Heregulin 10 ng/ml）。

添加抗生素（青霉素/链霉素）和抗真菌剂（如两性霉素B）。

5、培养条件：

37，5% CO，高湿度环境。

原代细胞传代次数有限（通常≤3代），需及时冻存。

三、鉴定方法

免疫荧光/组化：GFAP、S100B、Sox10 阳性染色。

qPCR：检测胶质细胞特异性基因（如PLP1、SOX10）。

功能实验：钙离子成像、细胞因子分泌检测（如IL-6、TGF-β）等。

四、常见问题与优化

低存活率：缩短消化时间、优化酶浓度、添加抗氧化剂（如NAC）。

污染风险：严格无菌操作，使用双抗和抗真菌剂。

纯度不足：增加分选步骤或差速贴壁次数。

五、应用方向

疾病模型：研究IBD、肠道感染、肠神经胶质瘤等病理机制。

药物筛选：测试抗炎药物或神经营养因子对EGCs的影响。

共培养系统：与肠神经元、上皮细胞共培养模拟肠道微环境。

武汉百欧博伟生物（EOUCELL）是由北京百欧博伟生物技术有限公司开创的专注于科研细胞及其周边产品研发及提供的高端品牌，主要业务涵盖原代细胞、细胞系，细胞培养基及细胞周边耗材等！2024年6月30日，北京百欧博伟生物技术有限公司与武汉百欧博伟生物技术有限公司签订战略合作协议，由武汉百欧博伟生物技术有限公司进行北京百欧博伟生物技术有限公司品牌武汉百欧博伟生物的全方位生物技术支持！


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