蒽酮比色法测糖
2007-07-13 10:25阅读：
蒽酮比色法测糖
一 目的 掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法
二 原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以与游离的已糖或多糖中的已糖基、戊糖基及已糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。
本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。
三 实验器材及试剂
马铃薯干粉
可调试移液器或移液管
可见分光光度计（723型）
电子分析天平
水浴锅
电炉子
蒽酮试剂：取2g蒽酮溶解到80%H2SO4中，以80%H2SO4定容到1000ml，当日配制使用。
标准葡萄糖溶液（0.1mg/ml）：100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000ml备用。
四、操作
1.制作标准曲线
取7支干燥洁净的试管，按表1顺序加入试剂，进行测定。以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线。
表
1 蒽酮比色法定糖——标准曲线的制作
单位：
ml
管号
|
0
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
标准葡萄糖溶液
|
0
|
0.1
|
0.2
|
0.3
|
0.4
|
0.6
|
0.8
|
蒸馏水
|
1.0
|
0.9
|
0.8
|
0.7
|
0.6
|
0.4
|
0.2
|
|
置冰水浴中5min
|
蒽酮试剂
|
4.0
|
4.0
|
4.0
|
4.0
|
4.0
|
4.0
|
4.0
|
|
沸水浴中准确煮沸10min，取出用流水冷却，室温放10min,于620nm处比色
|
葡萄糖浓度（mg/ml）
|
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A620nm
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2.样品含量的测定
样品液的制作：
精确称取马铃薯干粉
0.1g置于锥形瓶中—→加入
30ml沸水—→沸水浴
30min（不时摇动）—→取出，
3000rpm离心
10min（或过滤）—→反复洗涤残渣
2次—→合并滤液—→冷却至室温—→定容到
50ml的锥形瓶中—→再从中取出
1ml，再定容到
10ml的容量瓶中
样品液的测定：
（
1）取
4支试管，按照表
2加样（加蒽酮时需要冰水浴
5min冷却）
表
2 蒽酮比色法定糖——样品的测定
单位：
ml
试管号
|
1
|
2
|
3
|
4
|
样液
|
0
|
1.0
|
1.0
|
1.0
|
蒸馏水
|
1.0
|
0
|
0
|
0
|
蒽酮
|
4.0
|
4.0
|
4.0
|
4.0
|
A620nm
|
|
|
|
|
（
2）加样冷却完成后置沸水中煮沸
10min，取出流水冷却放置
10min，
620nm处比色测量各管
OD值。
（
3）以
1号试管作为调零管，
2、
3、
4号管的
OD值取平均后从标准曲线上查出样品液相应的含糖量。
3．结果计算：
C×
V
w = ————×
100%
m，
式中
w：糖的质量分数（
%）
C：从标准曲线中查出的糖质量分数（
mg/ml）
V：样品稀释后的体积（
ml）
m：样品的质量（
ml）
