卡诺氏液固定液及其作用

2020-07-21 17:00阅读：

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卡诺氏液固定液及其作用

疑难问题：减数分裂的观察一般要用卡诺氏液固定，那么有丝分裂的观察到底用不用卡诺氏液固定？卡诺氏液固定有利于染色和观察，但由于有丝分裂观察实验已经用了解离液，有酒精成分（浙科版只用盐酸作解离液），也起到固定的作用，所以，一般情况下，有丝分裂省去了卡诺氏液固定。
一、卡诺氏液固定和解离液
1、卡诺氏液固定
卡诺氏固定液适用于一般植物组织和细胞的固定，常用于根尖，花药压片及子房石蜡切片等。有极快的渗透力，根尖材料固定15—20min即可，花药则需1h左右，此液固定最多不超过24h，固定后用95%酒精冲洗至不含冰醋酸为止；如果材料不马上用，需转入70%酒精中保存。固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增

强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。
2、解离液
常用于根尖等细胞的涂片，它能使细胞壁中层（果胶质）溶解，而使细胞分开。
配方
酒精（体积分数95%) 1份，浓盐酸（质量分数15%) 1 份，二者混合即成（浙科版教材只用10%盐酸）。盐酸水解时间对染色效果影响很大，水解时间短，易着色但较难压片；水解时间长，染色慢而色淡；超过20min或水解温度过高，往往染色极淡，或染不上色。各种材料最合适的时间有差别，一般来说，大染色体材料水解时间可较长，小染色体材料宜短。
解离就是用要药液使组织的细胞相互分离开来，便于最后制片时能被压成一薄层进行显微观察。解离液中酒精的作用是迅速杀死细胞，固定细胞的分裂相；而盐酸能溶解果胶，从而使洋葱细胞的细胞壁软化，并使细胞间的中胶层物质溶解，从而达到分离细胞的目的。另外解离时间不宜过短，否则根尖未充分解离，压片时细胞分不开；但又不能太长，否则使根尖过分酥软，无法进行漂洗和染色，且染色体成分被破坏。这一步是实验成功与否的关键。
漂洗的目的是去除根中多余的解离液，特别是盐酸，防止解离过度，破坏染色体结构。
但观察动物细胞有丝分裂中，不能用盐酸和酒精来“解离”动物组织。动物细胞不分散的原因是细胞膜上的某些蛋白质分子嵌入到相邻细胞的细胞膜内，有的还形成凹凸式镶嵌结构。盐酸和酒精都不能破坏这两种结构，因此无法用盐酸和酒精来“解离”动物组织。
附：减数分裂过程中的实验过程。
一、目的
学习生殖细胞的取材和染色体制片，认识减数分裂各时期的形态特征。
二、原理
减数分裂是形成生殖细胞的一种特殊方式的细胞分裂。它是遗传学中一个特别重要的事件，是维持大多数动植物品种染色体数目世代稳定传递的根本机制。同时，基因的分离、自由组合以及交换无不是通过减数分裂发生的。可以说减数分裂是经典遗传学的根本，动植物都是通过减数分裂形成配子，所以减数分裂通常以植物的花粉母细胞或动物的精巢、卵巢作材料进行观察。减数分裂的特点是：连续进行两次核分裂，而染色体仅复制一次，从而形成四个只含单倍数染色体的产物——生殖细胞（或配子）。
三、材料
1．小麦雄花序。
2．蝗虫精巢。
四、器具和试剂
镊子、解剖刀、解剖针、载玻片、盖玻片、酒精灯、吸水纸、滴瓶、皮头铅笔、火柴、显徽镜。
卡诺氏固定液，改良苯酚品红、70％酒精。
五、步骤
（一）小麦花粉母细胞涂片观察
1．取材和固定：当小麦植株开始挑旗，旗叶与下一叶片的叶耳间距约3～5cm，花药长度约2.0～2.5mm，气温在23～25时，将穗子剥出，在卡诺氏固定液中固定24小时。如暂不制片可转入70％酒精中，4保存。
2．染色和压片：从穗中部小穗中取出花药若干置于载片上，切去花药端部，滴两滴改良苯酚品红，用摄子挤压花药，使内含物全部挤出，除去药壁，将挤出的细胞轻轻敲打；如果花药较小，也可滴两滴染液后用镊子直接将花药捣碎，去除未碎的组织，然后盖上盖玻片，在酒精灯上微微加热。用左手拇指及食指固定盖片与载片，勿使其移动。右手拇指用力压盖玻片，使细胞伸展开。
3．镜检：由于小麦小穗发育是以中部小穗最先发育，然后依次向上、下推移，所以在一个穗子上往往能找到减数分裂的若干时期。如果中部花药尚未进入减数分裂时期则需要另选一个更大的稳于取花药制片。
（二）蝗虫精巢精母细胞制片观察
1．取材和固定：捕捉进入繁殖期的雄性蝗虫，剪开胸腹部体壁，放入卡诺氏固定液中固定24小时，暂不制片时，可重复固定一次，转入70％酒精中4保存。
2．制片：取虫体剪去翅膀，在翅的基部后方，相当于腹部前端的背侧，仔细剪干体壁，从精巢中前部取几段精细管放在载片上，用解剖针撕碎精细管，除去大块管壁组织，涂匀。
3．染色观察：加改良苯酚品红3～5滴，染色10分钟（必要时可在酒精灯上快速掠几下）加上盖片和吸水纸，以指压法压片。
光镜下，可以看到减数分裂的各个时期，以及精子的形成过程。

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