上海2004年高考考到赤霉素对诱导α-淀粉酶的实验，最近好多地方，包括浙江调研卷也考到这方面的题。
（浙江调研卷）某兴趣小组用某品种的大麦种子进行“不同浓度赤霉素对诱导α-淀粉酶合成的影响”的预实验。其基本步骤如下：
①用刀片将大麦种子切成
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上海2004年高考考到赤霉素对诱导α-淀粉酶的实验，最近好多地方，包括浙江调研卷也考到这方面的题。
（浙江调研卷）某兴趣小组用某品种的大麦种子进行“不同浓度赤霉素对诱导α-淀粉酶合成的影响”的预实验。其基本步骤如下：
①用刀片将大麦种子切成
有胚、无胚两半，消毒后在无菌条件下浸泡48 h。
②按下表在培养瓶中加入相应的试剂和材料，在 30℃下振荡培养12 h。
③取6支试管，编号并各加入1 mL 0.1%淀粉溶液，再从上述培养瓶中各吸取0.2 mL溶液加入对应编号试管并摇匀。将试管置于30℃恒温水浴保温10 min，然后在各试管中立即加入2 mL碘液，振荡后观察颜色变化并记录。
请回答：
答案：（1）排除胚产生的赤霉素对实验的干扰（2分）
实验原理：淀粉性种子在萌动过程中，胚释放出来的赤霉素能诱导糊粉层细胞中α-淀粉酶基因的表达，引起α-淀粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解为糖。通过碘试法比色测定淀粉在酶催化反应过程中的消耗量，可以定量分析α-淀粉酶的活力。
一、仪器、药品与材料
（一）实验材料
大麦(Hordeum vulgare L.)或小麦(Triticum aestivum L.)等禾本科植物种子。
（二）仪器与用品
（三）试剂
1．1 ％次氯酸钠溶液： 称取1 g次氯酸钠粉末溶解于1000 mL水中。
2．0.1 ％淀粉磷酸盐溶液：取 1 g 淀粉和 8.16 g KH2PO4，用蒸馏水配制成 1000 mL的溶液。
3．以0.1 ％淀粉磷酸盐溶液为母液，分别配制0、1、2、3、4、5、6、7 mg/mL的淀粉溶液。
4．2 × 10-5 mol/L 赤霉素溶液：称取6.8 mg的GA3 放入烧杯中，加少量 95 ％酒精使其溶解，移入1000 mL容量瓶中，加水定容至刻度，然后再稀释成 2 × 10-6mol/L、2 × 10-7 mol/L和2 × 10-8 mol/L 三种浓度的赤霉素溶液。
5．10-3 mol/L 醋酸缓冲液，pH 4.8：缓冲液配制参见附录。每1000 mL 10-3 mol/L 醋酸缓冲液中加入1 g链霉素，使每mL缓冲液中含链霉素1 mg。
6．I2-KI 溶液：取 0.6 g KI 和 0.06 g I2 溶于1000 mL 0.05 mol/L的HCl 中。
二、实验步骤
1．取样：选取大小一致、健康完好的大麦或小麦种子100 粒，用刀片将每粒种子横切成有胚和无胚的半粒，分装于2个烧杯中备用。
2．表面消毒：向2个烧杯中加入1%次氯酸钠溶液，以浸没种子为度。消毒 15 min后，用无菌水冲洗3次，备用。
3．处理浓度：将6只青霉素小瓶编号后，按表40-1加入溶液和材料。溶液混匀后，1~6号小瓶中赤霉素的最终浓度分别为：0 、2×10-8、 2 × 10-7 、 2×10-6和2×10-5 mol/L。将青霉素小瓶置于恒温振荡器中于 25 ℃下振荡培养24 h。
4．淀粉酶活力分析：培养完毕后，从每个小瓶中吸取培养液0.1 mL，分别置于事先盛有1.9 mL 0.1%淀粉磷酸盐溶液的试管中，摇匀，在30℃温箱或水浴中精确保温10 min。用滴管各取出1滴反应液滴于白瓷板的6个穴中，滴加1滴I2-KI，观察显色情况，比较各穴中颜色的差异。若用白瓷板显色时差异尚不明显，则延长保温时间，直至白瓷板上有显色差异为止。取出试管各加I2-KI溶液2 mL、蒸馏水5 mL，充分摇匀，于580nm条件下测定吸光度（OD）值，以蒸馏水作空白对照。
表GA3处理浓度及方法
![[转载]实验：赤霉素对α-淀粉酶的诱导形成（碘-碘化钾染色法）](http://s5.sinaimg.cn/bmiddle/445dac3bgd3ddad1dd424&690 "[转载]实验：赤霉素对α-淀粉酶的诱导形成（碘-碘化钾染色法）")
以淀粉浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，或直接计算直线回归方程。
6．结果计算
根据OD值从标准曲线上查得或使用直线回归方程计算出各处理中淀粉含量。第1瓶为淀粉的原始量（X），第2瓶为带胚半粒种子反应后淀粉的剩余量（Y），第3~ 6瓶为无胚半粒种子加入不同浓度赤霉素溶液反应后淀粉的剩余量 (Y) 。
被水解淀粉的含量 (% )=[(X-Y)/X] × 100
以被水解的淀粉量衡量淀粉酶活性大小，绘制赤霉素浓度与淀粉酶关系曲线，并解释实验结果。
三、思考题
１．实验中为何要用 1 %次氯酸钠溶液处理小麦种子？为何要在醋酸缓冲液中加入链霉素？
２．本实验为何要将小麦种子分成有胚和无胚的半粒？为何1 号和2 号瓶中都没有加入赤霉素溶液，但反应完后两者溶液的吸光值却不同？
②按下表在培养瓶中加入相应的试剂和材料，在 30℃下振荡培养12 h。
|
瓶号[来源:Zxxk.Com][来源:学#科#网Z#X#X#K] |
缓冲液（mL）[来源:学科网ZXXK] |
赤霉素溶液 |
实验材料 |
||
| 浓度（mol·L-1） |
用量（mL） |
有胚种子（个） |
无胚种子（个） |
||
| 1 |
2 |
0 |
10 |
||
| 2 |
2 |
0 |
10 |
||
| 3 |
1 |
2×10－8 |
1 |
10 |
|
| 4 |
1 |
2×10－7 |
1 |
10 |
|
| 5 |
1 |
2×10－6 |
1 |
10 |
|
| 6 |
1 |
2×10－5 |
1 |
10 |
|
③取6支试管，编号并各加入1 mL 0.1%淀粉溶液，再从上述培养瓶中各吸取0.2 mL溶液加入对应编号试管并摇匀。将试管置于30℃恒温水浴保温10 min，然后在各试管中立即加入2 mL碘液，振荡后观察颜色变化并记录。
请回答：
答案：（1）排除胚产生的赤霉素对实验的干扰（2分）
实验原理：淀粉性种子在萌动过程中，胚释放出来的赤霉素能诱导糊粉层细胞中α-淀粉酶基因的表达，引起α-淀粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解为糖。通过碘试法比色测定淀粉在酶催化反应过程中的消耗量，可以定量分析α-淀粉酶的活力。
一、仪器、药品与材料
（一）实验材料
大麦(Hordeum vulgare L.)或小麦(Triticum aestivum L.)等禾本科植物种子。
（二）仪器与用品
（三）试剂
1．1 ％次氯酸钠溶液： 称取1 g次氯酸钠粉末溶解于1000 mL水中。
2．0.1 ％淀粉磷酸盐溶液：取 1 g 淀粉和 8.16 g KH2PO4，用蒸馏水配制成 1000 mL的溶液。
3．以0.1 ％淀粉磷酸盐溶液为母液，分别配制0、1、2、3、4、5、6、7 mg/mL的淀粉溶液。
4．2 × 10-5 mol/L 赤霉素溶液：称取6.8 mg的GA3 放入烧杯中，加少量 95 ％酒精使其溶解，移入1000 mL容量瓶中，加水定容至刻度，然后再稀释成 2 × 10-6mol/L、2 × 10-7 mol/L和2 × 10-8 mol/L 三种浓度的赤霉素溶液。
5．10-3 mol/L 醋酸缓冲液，pH 4.8：缓冲液配制参见附录。每1000 mL 10-3 mol/L 醋酸缓冲液中加入1 g链霉素，使每mL缓冲液中含链霉素1 mg。
6．I2-KI 溶液：取 0.6 g KI 和 0.06 g I2 溶于1000 mL 0.05 mol/L的HCl 中。
二、实验步骤
1．取样：选取大小一致、健康完好的大麦或小麦种子100 粒，用刀片将每粒种子横切成有胚和无胚的半粒，分装于2个烧杯中备用。
2．表面消毒：向2个烧杯中加入1%次氯酸钠溶液，以浸没种子为度。消毒 15 min后，用无菌水冲洗3次，备用。
3．处理浓度：将6只青霉素小瓶编号后，按表40-1加入溶液和材料。溶液混匀后，1~6号小瓶中赤霉素的最终浓度分别为：0 、2×10-8、 2 × 10-7 、 2×10-6和2×10-5 mol/L。将青霉素小瓶置于恒温振荡器中于 25 ℃下振荡培养24 h。
4．淀粉酶活力分析：培养完毕后，从每个小瓶中吸取培养液0.1 mL，分别置于事先盛有1.9 mL 0.1%淀粉磷酸盐溶液的试管中，摇匀，在30℃温箱或水浴中精确保温10 min。用滴管各取出1滴反应液滴于白瓷板的6个穴中，滴加1滴I2-KI，观察显色情况，比较各穴中颜色的差异。若用白瓷板显色时差异尚不明显，则延长保温时间，直至白瓷板上有显色差异为止。取出试管各加I2-KI溶液2 mL、蒸馏水5 mL，充分摇匀，于580nm条件下测定吸光度（OD）值，以蒸馏水作空白对照。
表GA3处理浓度及方法
以淀粉浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，或直接计算直线回归方程。
6．结果计算
根据OD值从标准曲线上查得或使用直线回归方程计算出各处理中淀粉含量。第1瓶为淀粉的原始量（X），第2瓶为带胚半粒种子反应后淀粉的剩余量（Y），第3~ 6瓶为无胚半粒种子加入不同浓度赤霉素溶液反应后淀粉的剩余量 (Y) 。
被水解淀粉的含量 (% )=[(X-Y)/X] × 100
以被水解的淀粉量衡量淀粉酶活性大小，绘制赤霉素浓度与淀粉酶关系曲线，并解释实验结果。
三、思考题
１．实验中为何要用 1 %次氯酸钠溶液处理小麦种子？为何要在醋酸缓冲液中加入链霉素？
２．本实验为何要将小麦种子分成有胚和无胚的半粒？为何1 号和2 号瓶中都没有加入赤霉素溶液，但反应完后两者溶液的吸光值却不同？