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[转载]电转染仪能否直接把质粒转到细胞核里面去?

2014-09-01 16:04阅读:

Q:电转染仪能否直接把质粒转到细胞核里面去?
A:尽管没有研究表明如此,可是可以推断电转染方法能够直接把质粒转到细胞核里面去。依据如下:
依据一:电转可以转染不分裂的细胞,如成体细胞、不分裂的feeder细胞等,因此,不会有在细胞分裂期时核膜重建把外源基因包裹到细胞核中或外源基因在分裂期得以转录的可能,只有一种可能,即质粒被直接转到细胞核中去了。
依据二:核转运具有特异性。Lipo2000很难转染上述不分裂细胞,而转染分裂细胞则相对容易,一方面,Lipo2000确实不容易与不分裂细胞的细胞膜发生融合;另一方面,尽管它可以携带质粒进入到细胞质中去,可是由于核膜的转运具有特异性,而质粒上又没有利于转运的特异序列。

核转运与质粒上的DNA序列有关
Cell-specific nuclear import of plasmid DNA http://www.nature.com/gt/journal/v6/n6/full/3300924a.html

不同细胞转运同一质粒入核的能力不同
Nuclear-associated plasmid, but not cell-associated plasmid, is correlated with transgene expression in cultured mammalian cells.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10933952
依据三:电穿孔过
程中,核膜也可能被穿孔,质粒由此进入到细胞核中去。
不管怎样,只要转染效率高,就说明质粒进入到细胞核中去了。至于用哪款电转染仪,质粒整合到基因组上的概率更高?由于质粒整合到基因组上都是随机的,概率很低。如果非要一较高低,那自然是电转染效率高的整合概率更高了。

另附一篇关于lentivirus为何能感染非分裂细胞的文章:
HIV infection of non-dividing cells: a divisive problem
http://www.retrovirology.com/content/3/1/74

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