[转载]甲基绿和吡罗红染色原理

观察DNA和RNA在细胞中的分布—Brachet反应的染色原理甲基绿（Methyl green)和吡罗(Pyronin, 又译派若宁、派洛宁，又称焦宁）
染色原理
将甲基绿和派若宁配成混合染液（Unna试剂）时，甲基绿多和DNA选择性结合显示蓝绿色，派洛宁多和RNA选择性结合显示红色。其原因可能是当配成混合染液时，两种染料同时存在而出现竞争作用：甲基绿与DNA亲和力大,易和聚合程度高的DNA结合，而派洛宁与聚合程度较低的RNA结合。但空间构型不完整的DNA也能与派洛宁结合显示红色。故用该法所得的红色反应来显示RNA的存在并不具有专一性。需做对照试验：利用专一性的RNA酶使嗜派洛宁染色性消减，这种反应具专一性，借助该反应才能说明被染上红色的确是RNA，故做对照实验是必要的。
一般认为甲基绿与DNA亲和力高、派若宁与RNA亲和力高的原因有两个：
1。DNA和RNA分子的聚合程度不同，DNA比RNA聚合程度高。
2。甲基绿分子的两个N基团正电荷的距离正好与DNA分子的负电基团间的距离相一致所以容易结合，而派若宁只有一个N基团正电荷，竞争不过DNA与甲基绿的结合故一般认为甲基绿对DNA的结合能力主要与DNA分子的双螺旋空间构型的完整性有关
甲基绿
甲基绿生产厂家不同，甚至批号不同染色效果会有较大差别。商品甲基绿常混有甲基紫，会影响染色效果。甲基绿溶于水，不溶于氯仿（三氯甲烷）；甲基紫溶于氯仿。利用该特性可用氯仿洗脱甲基紫：将甲基绿水溶液放入分液漏斗，加入氯仿，用力振摇，然后静置，待溶液分层后弃氯仿。如此反复数次，直到氯仿不呈紫色为止。
染色液（Unna试剂）的配制
甲液：5%Py