柱层析出现断层

湿法装柱后，经赶气泡，加压压实后，上样。开始洗脱后在柱上出现不规则裂痕，请问大家有遇到这种情况吗？是什么原因呢？大家交流一下吧。

硅胶柱出现断层的原因，我想可能有：
一、洗脱剂没有脱气。特别是室内温度较高时，几相混合的洗脱剂，如果没有超声脱气，其中溶解的空气慢慢释放出来会使色谱柱断裂。
二、换洗脱剂。有些溶剂硅胶膨胀而还有的溶剂使硅胶收缩，洗脱剂梯度变化太大也会使色谱柱断层。
三、如果楼主用了加压装置如液氮，可能是加液时放气太快，气体从下端口冲进，使硅胶分段。这种情况不注意的话最容易导致硅胶断层。
此现象常见，可避免。
举例说明：
石油醚湿法装柱，二氯甲烷溶解样品。装柱后石油醚不要压到硅胶层，留5mm，加入二氯甲烷的样品溶液，这样不会有空气进入，一般不会有裂痕。
万一有气泡或裂痕，用极性最低的溶剂（如乙酸乙酯-石油醚洗脱，就选石油醚）多冲洗，将气泡赶出，再梯度淋洗。只要你的柱子够长，一般不会有多大影响的。

http://www.ionicliquid.org/forum/dispbbs.asp?boardid=19&Id=553

3.柱层析操作中应注意的问题
(1)要控制淋洗剂流出的速度。一般控制流速为1滴/秒。若流速太快，样品在柱中的吸附和溶解过程来不及达到平衡，影响分离效果。若流速太慢，分离时间会拖得太长。有时，样品在柱中停留时间过长，可能促成某些成分发生变化。或流动相在柱中下行速度小于样品的扩散速度，会造成色带加宽、交合甚至根本不能分离。
(2)以下现象会严重影响分离效果，必须尽力避免。
a.色带过宽，界限不清。造成的原因可能是柱的直径与高度比选择不当，或吸附剂、淋洗剂选择不当，或样品在柱中