蛋黄抗体制备与应用研究进展
2011-01-12 09:08阅读：
张国红 四川华西动物药品研究所 于飞 吴忠伟 四川绵阳宝莱生物药业有限公司
王 刚 杜国清 汪勇 四川华西动物药业有限公司 林永祯
西南科技大学生命科技学院
一、蛋黄抗体（ＩｇＹ）概述
（一）蛋黄抗体（ＩｇＹ）的概念
蛋黄抗体（Ｅｇｇ ｙｏｌｋ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｅｙＡｂ）是指蛋黄中存在的抗体，也称蛋黄免疫球蛋白（Ｅｇｇ
ｙｏｌｋｉｍｍｕｎｏｇｂｕｌｉｎｓｅｙｌｇ）。科学家在鸟类的血液循环里发现三种免疫球蛋白（ＩｇＧ、ＩｇＡ与ＩｇＭ），母鸡在细胞分裂产蛋的过程中，会将其免疫球蛋白转移至鸡蛋，母鸡血浆中之ＩｇＡ与ＩｇＭ，会在输卵管中与其他的蛋白质结合而构成鸡蛋蛋白的部分。比较特别的是，在成熟期中，血清ＩｇＧ会经蛋黄薄膜转移到蛋黄中，蛋黄的ＩｇＧ与哺乳类的ＩｇＧ在分子量、等电点、细胞膜上Ｆｃ受质的键结构上存在着相异点而被特定称为ＩｇＹ。鸡卵黄免疫球蛋白Ｇ抗体是一种７Ｓ免疫球蛋白，与哺乳动物ＩｇＧ略有不同。该蛋白质分子量约为１８０ｋＤａ，含两个亚单位，即６７～７０ｋＤａ的重链和２２～３０ｋＤａ的轻链，存在于免疫后母鸡的卵黄中。
早在６０年代，科学家们就发现鸡卵黄中存在ＩｇＧ抗体，其含量与鸡血清相似甚至更高，但一直未引起足够的重视。显然是由于很难将ＩｇＧ抗体从丰富的卵黄脂质中分离出来，使得鸡蛋作为抗体来源的研究受到限制。直到８０年代初，Ｐｏｌｓｏｎ和Ｊｅｎｓｅｎｉｕｓ相继建立了有效且相对简便的聚乙二醇（ＰＥＧ）提取法和硫酸葡聚糖提取法后，有关这方面的研究才比较系统和深入。ｅｙＩｇ的功能与哺乳动物ＩｇＧ类似，但是二者之间又存在许多不同，ＬｅｓｌｉｅａｎｄＢ．ＣｌｅｍＩｇｙ１９６９提出以ＩｇＧ表示。ＥｙＩｇ是母禽血清ＩｇＧ主动运转到蛋黄中富积形成的，其浓度高于血清ＩｇＧ浓度。Ｅ．ｏｒｌａｎｓ，１９６７理化性质与禽血清ＩｇＧ相似。
在兽医领域，人们长期以来是从高免动物（如兔、鸡、牛、猪、羊、小鼠、大鼠、豚鼠等）的血清、初乳或单克隆抗体分离ＩｇＧ。近十几年来，国内外学者就卵黄抗体的研究和开发做了许多工作，证明了免疫鸡
的蛋是提供特异性ＩｇＧ抗体最方便、最廉价的来源。Ｊｃｎｓｃｎｃｕｓ等（１９８１）报道认为，一只母鸡在一个月中生产制备的卵黄抗体相当于５００ｍｌ血清抗体。Ｂａｒ－Ｊｏｓｅｐｈ（１９８０）实验证明每ｍｌ卵黄含有３～２５ｍｇＩｇＧ，也就是说每个蛋可提供４０～５００ｍｇＩｇＧ。当然，免疫后卵黄抗体水平高低主要取决于抗原的种类、浓度、免疫的途径和加强免疫的时间等。母鸡通过两种途径将其全部同型抗体转移到鸡蛋。首先是循环血液中的血浆抗体转移到成熟的卵泡中，这种选择性转移到卵巢滤泡的α－球蛋白主要是ＩｇＧ。第二个途径是在输卵管中进行，抗体与在这里分泌的卵蛋白一起混入到蛋白，而在蛋白中发现的免疫球蛋白主要是ＩｇＭ和ＩｇＡ，但不含ＩｇＧ。Ｌｏｓｃｈ（１９８６）证明了ｙＩｇＧ和卵黄抗体对酸和温度具有一定抵抗力。卵黄抗体按１∶２０进行稀释与０．１ｍｏｌ／１ＨＣｌ作用２ｈ时，ＩｇＧ浓度减少４０％，抗体效价从ｌｏｇ２９降到ｌｏｇ２６；当其与１ｍｏｌ／１ＨＣｌ作用３０ｍｉｎ时，ＩｇＧ活性降到ｌｏｇ２１；作用６０ｍｉｎ，ＩｇＧ活性才完全消失。试验还证明将卵黄置于沸水中煮１０ｍｉｎ，ｙＩｇＧ和卵黄抗体活性降为零，煮６ｍｉｎ几乎对卵黄中心的ｙＩｇＧ和卵黄抗体没有影响。
（二）蛋黄抗体ＩｇＹ与ＩｇＧ的比较
ＩｇＹ与ＩｇＧ的比较见下图１和表１．
图１ 哺乳动物 ＩｇＧ 与鸟类 ＩｇＹ 的结构图
表１ ＩｇＧ与ＩｇＹ的比较
分子量
ＥＬＩＳＡ
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ
免疫组化
免疫沉淀
Ｐｒｏｔｅｉｎ－Ａ／Ｇ ｂｉｎｄｉｎｇ
Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｗｉｔｈ ｍａｍｍａｌｉａｎ ＩｇＧ
Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｆａｃｔｏｒ
Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ
Ｍａｍｍａｌｉａｎ ＩｇＧ
１５０ＫＤ
ｙｅｓ
ｙｅｓ
ｙｅｓ
ｙｅｓ
ｙｅｓ
ｙｅｓ
ｙｅｓ
ｙｅｓ
Ａｖｉａｎ ＩｇＹ
１８０ＫＤ
ｙｅｓ
ｙｅｓ
ｙｅｓ
ｙｅｓ
ｎｏ
ｎｏ
ｎｏ
ｎｏ
从表１可以看出，鸟类 ＩｇＹ 与哺乳动物
ＩｇＧ在科研实验的使用上没有明显的差别，而且鸟类ＩｇＹ还有它的一些优点，如与哺乳动物ＩｇＧ没有交叉反应；不与风湿因子反应，可降低免疫化验中的假阳性率；也不激活哺乳动物的补体等。另外，鸟类ＩｇＹ还有热稳定性好等优点。
二、蛋黄抗体（ＩｇＹ）的提取与纯化
鸡蛋黄作为特异抗体ＩｇＹ的来源有许多优点。如：母鸡易于饲养，费用不高；收集鸡蛋方便，无需抽动物血，无损伤，符合现代动物保护规则；产生有效免疫反应所需抗原量小，尤其是高度保守的哺乳动物蛋白质对种系发生学上距离较远的禽类通常有较强的免疫原性。Ｃａｒｒｏｌｌ和Ｓｔｏｌｌａｒ（１９８３）仅用总量３０～４７５μｇ的增殖细胞核抗原，成功地产生鸡抗弱免疫原性ＲＮＡ多聚酶ＩＩ的抗体。Ｇｏｔｔｓｔｅｉｎ和Ｈｅｍｍｅｌｅｒ（１９８５）实验表明，在一个月内收集的提纯ＩｇＹ产量比兔血清高１８倍。Ｇａｓｓｍａｎｎ等用２０～３０μｇ增殖细胞核抗原初次免疫２０天后出现特异ＩｇＹ抗体３０天达高峰，并持续８１天以上。卵黄中无其它Ｉｇ类，使得ＩｇＹ易于提纯等。此外，某些病原微生物如轮状病毒，衣原体等可在鸡胚中增殖。用这些感染的鸡胚组织为抗原免疫鸡获取相应抗体时，可省去抗原提纯的复杂过程。台湾学者苏和平等以酸、碱、酒精、食盐及加热等五种加工条件处理市售鸡蛋，结果显示室温下以酸（ＰＨ值２．７３）处理壳蛋４８小时，蛋黄中ＩｇＹ已丧失９９％；碱（４．２％ｗ／ｖ氢氧化钠）处理１４天或饱和食盐水处理２８天，可保留蛋黄中ＩｇＹ２４％～３３％；而以酒精（１６％ｖ／ｖ）处理４天或加热处理成溏心蛋，则可保留４７％以上。另以不同加热条件处理免疫鸡蛋，显示在使蛋黄中心温度低于７０℃下加热，依加热时间的长短，蛋黄中ＩｇＹ可保存２１％～８１％。近十几年来，已建立了许多较为高效而经济的方法。这些方法大多以ＰＥＧ、硫酸葡聚糖、自然胶，如藻酸钠、角叉菜胶（Ｈａｔｔａ等，１９９０）或乙醇沉淀等方法初步纯化蛋白质。产量约为每ｍｌ卵黄提取ＩｇＹ５～７．５ｍｇ，纯度８７％～８９％。Ａｋｉｔａ等在此基础上建立了水稀释法。即以９份水稀释１份卵黄，离心去除颗粒，再用硫酸盐沉淀法浓缩，并经超滤或乙醇沉淀或盐沉淀进一步纯化、浓缩，再经凝胶过滤提纯，产量达９．８ｍｇＩｇＹ／ｍｌ卵黄，纯度９４％。此实验中以ＰＥＧ代替硫酸盐沉淀，可进一步提高产量。Ｂａｄｅ和Ｓｔｅｇｅｍａｎｎ（１９８４）用预冷的丙烷和丙酮（－２０℃）沉淀蛋白质并去除脂质，经ＤＥＡＥ柱层析进一步纯化，方法简便、省时。其ＩｇＹ抗体活性与用Ｐｏｌｓｏｎ法提纯的ＩｇＹ之间无明显差别。且稳定性好，经３次以上冻融，抗体活性未见改变。Ｈａｓｓｌ和Ａｓｐｏｃｋ用疏水交换层析和凝胶过滤二步法分离提纯ＩｇＹ，虽然产量不及ＰＥＧ或乙醇沉淀法，但活性相似，且纯度较高。ＩｇＹ的进一步提纯可用提纯其它蛋白质的方法。常见的有凝胶过滤、ＤＥＡＥ纤维素阴离子交换柱层析和亲和层析等方法。必须指出，许多动物ＩｇＧ均可用蛋白Ａ亲和分离。但ＩｇＹ不能与蛋白Ａ结合。ＭｃＣａｎｎｅｌ和Ｎａｋａｉ（１９９０）用ＤＥＡＥ离子交换层析分离ＩｇＹ亚群。在提高磷酸盐离子浓度的同时，始终维持一定的ＰＨ值。固相金属离子亲和层析是一种蛋白质纯化技术。最常用的金属离子有Ｃｕ２＋、Ｎｉ２＋，Ｃｏ２－、Ｚｎ２＋。研究表明Ｆｅ３＋离子与磷酸化氨基酸有很强的亲和力。结合于离子柱上的蛋白质常通过降低ＰＨ值或提高盐浓度或二者合并进行洗脱。Ｇｒｅｅｎｅ和Ｈｏｌｔ用固相金属离子（Ｆｅ３＋）亲和层析，通过改变ＰＨ值梯度，根据４个洗脱峰将ＩｇＹ分为４个亚群。Ｍａｒｔｉ等（１９９７）将重组蛋白抗原结合于Ｎｉ－ＮＴＡ柱上，用免疫亲和层析纯化特异ＩｇＹ，效果良好。Ｋｉｍ等用特异性ＩｇＹ制成抗生物素蛋白质－酰化生物素系统的亲和层析柱，用于ＩｇＧ的分离和提纯。用不同的提取方法所得的ＩｇＹ分子量也各异。Ｂｉｚｈａｎｏｖ比较了氯仿、萄聚糖蓝ｄｅｘｔｒａｎｂｌｕｅＤＢ和ＰＥＧ三种提取ＩｇＹ的方法，前者ＩｇＹ产量比后二种方法高２～４倍；用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其相应产物，发现ＤＢ法提纯获得三种主要的蛋白成分：３４．７ＫＤａ、４１ＫＤａ和６６ＫＤａ，并含少量４５ＫＤａ成分；氯仿法提取主要含两种蛋白成分：４５．７ＫＤａ或７５．２ＫＤａ；而用ＰＥＧ提取获得以６６ＫＤａ为主的蛋白成分，氯仿及ＰＥＧ法提取的蛋白质中也包含少量４１～８０ＫＤａ的ＩｇＹ。
三、精制蛋黄抗体（ＩｇＹ）制备工艺
（一）精制蛋黄抗体生产工艺流程图
免疫抗原 产蛋鸡群 蛋壳表面消毒 蛋黄分离
稀释浓缩 灭活 酸化 离心分离 深滤
超滤浓缩 除菌过滤 半成品 检定 分装、包装
成品 检定 出品
（二）蛋黄抗体工艺技术
免疫抗原制备系由自然病例采集毒株，经分离、脱毒、纯化、组织细胞培养，运用灭活技术保证抗原免疫原性同时防止外源病毒、细菌、支原体污染。利用高免鸡蛋作为抗体生产原料，利用蛋鸡作为适于蛋黄抗体生产的反应器，研究蛋黄抗体在鸡体内代谢规律并据此确定对鸡的免疫程序，保证抗体来源的持续广泛性和规模生产的经济性。鸡蛋蛋黄内脂肪含量高，脂肪与蛋白质比例为２：１，脂肪主要以脂蛋白形式存在，蛋黄是良好的微生物培养基，蛋黄内含有霉形体、沙门氏菌、腺病毒及呼肠孤病毒等可以垂直传播给雏鸡的病原。由此，在蛋黄抗体的萃提精制过程中，既要保证抗体生化结构的完整，生物活性的良好存在，又要彻底去除垂直传播病原，采用目前国际通用的低温乙醇法、盐析法或层析法等蛋白质分离工艺无法解决上述难题。因此，目前欧美发达国家仅将蛋黄抗体用作口服制剂，国内也仅有实验室粗制蛋黄抗体产品。有学者采用综合了物理、化学、生物等多种灭活技术，并结合酸化法、高速离心、超过滤等现代生物技术的ＨＯＦ灭活工艺，已经成功地解决了上述难题。精制鸡传染性法氏囊病蛋黄抗体的安全性、有效性已获得二类新生物制品证书。小鹅瘟精制蛋黄抗体、鸭病毒性肝炎精制蛋黄抗体已由四川绵阳宝莱生物药业有限公司联合有关科研单位完成基础研究，并着手向农业部申报新兽药证书。精制蛋黄抗体在生产制造过程中，应充分考虑蛋黄中脂蛋白、高磷蛋白、球蛋白之间的相互作用，选择最佳离子强度、ＰＨ值环境，并加入适量稳定剂，使产品能在室温下较长时间储存，其生物活性及物理外观没有任何变化，便于贮存、运输，极大的方便临床使用。
四、精制蛋黄抗体和粗制蛋黄抗体
初始使用的蛋黄抗体为粗制抗体．即将高免后达到一定抗体滴度的蛋，消毒后分离蛋黄、蛋清，将蛋黄用含一定量的福尔马林生理盐水稀释，搅匀，过滤后，再加入适当抗生素即成。粗制蛋黄抗体有如下缺点：蛋黄内含有一些可以垂直传播给雏鸡的病原，如霉形体、沙门氏菌、腺病毒及呼肠孤病毒等；其生产中未进行严格消毒和灭活；蛋壳表面污染的常在菌，用粗制方法无法灭活；高浓度蛋黄液为污染菌引起腐败提供最有利的条件；不能也不敢贮存；使用极不方便，因其粘度大，易堵塞注射器；使用中经常出现应激反应；稍有不慎即致人为传毒。国外鉴于此，将其制成干粉，作为饲料添加剂供口服。
精制抗体必须解决两个问题，一是彻底灭活技术；二是大规模生产的萃提技术和工艺流程及其相配套的一系列检验、检测等。目前有学者研究精制抗体的生产工艺已取得了如下进展：Ｈ．Ｏ．Ｆ灭活技术获得成功；萃提采取酸化法，结合离心、超滤、除菌等，获得了可供注射用的精制蛋黄抗体。精制蛋黄抗体必须经过无菌检验、安全检验、效力检验才能进入市场。精制蛋黄抗体有如下特点：安全，不具备垂直传播病原的危险、不产生应激反应，对注射部位没有刺激；不损伤法氏囊，无免疫抑制；使用方便，易于保存（可常温保存和低温保存）；注射后３～６ｈ，抗体即被吸收入血，开始发挥效能，中和相应的病毒、细菌或毒素，中止病原对机体的危害，缓解症候，恢复健康；注射一次有效持续期为５－７天。精制蛋黄抗体有效期为冰箱保存（４－８℃），有效期至少２年以上；室温保存，有效期为１１个月；避光保存为宜。
五、蛋黄抗体（ＩｇＹ）在兽医临床和其它方面的应用
（一）防治大肠杆菌性疾病
Ｆａｒｒｅｌｙ等用产毒性大肠杆菌免疫制备特异ＩｇＹ抗体经口给药预防兔腹泻病。其中阴性对照组在用产毒性大肠杆菌攻击后，７２ｈ内全部发生严重腹泻；实验组在攻击前４天开始喂卵黄抗体，攻击后未见明显不良反应。实验还表明正常卵黄有部分保护作用：４只家兔喂以正常卵黄，其中３只发展为中度腹泻，１只完全正常，不发病。该研究小组还进行了体外实验，表明：ＩｇＹ干扰Ｅ．ｃｏｌｉ与提纯的小肠粘膜蛋白结合；ＩｇＹ的此项干扰作用优于鸡血清ＩｇＧ抗体。肖驰等制备的抗猪大肠埃希氏菌卵黄抗体在具有几十年历史的老猪场（大肠埃希氏菌血清型多达３０多种）使用，给初生仔猪投服卵黄抗体后，７日龄的仔猪腹泻率由４７．７％下降至９．４％和１８．６％，８～１２日龄仔猪腹泻率也比对照组下降了９．５％和１２．１％。表明卵黄抗体能有效地防治猪大肠埃希氏菌Ｋ８８、Ｋ９９、９８７Ｐ和Ｆ４１引起的腹泻。李学伍等将抗仔猪大肠杆菌病卵黄抗体制成干粉，其效价不变，试验表明胃液对抗体干粉效价影响不大，该多价卵黄抗体粉对发病仔猪的治愈率最高可达９７．７％，比药物的治愈率高２１．２％。李国平等用猪大肠杆菌Ｋ８８、Ｋ９９、９８７Ｐ标准菌株做成混合株油佐制剂免疫蛋鸡以平板凝集试验定性高免鸡卵黄抗体对各菌株的凝集反应。结果表明高免鸡卵黄抗体对标准菌株均产生明显的凝集而未免对照鸡卵黄抗体不出现凝集，经醋酸纤维薄膜电泳分析高免鸡卵黄抗体的γ球蛋白含量显示比未免对照的鸡卵黄抗体有明显的提高。表明本研究的鸡高免卵黄中含有抗猪大肠杆菌的有效抗体。仔猪出生后口服猪大肠杆菌高免卵黄液可明显降低仔猪黄痢的发病率对已发病的黄、白痢仔猪用高免卵黄液４ｍｌ肌注连续２次有明显的治疗作用并且未发现副作用。张国红等选用经实验室确诊的患水肿病的仔猪２５０头，分别用猪水肿抗毒注射液（抗溶血性大肠杆菌ＩｇＹ）、猪康宁（复方亚硒酸钠－ＶＥ）注射液、尖峰抗肿呋塞咪注射液、氧氟沙星注射液肌肉注射作治疗试验。另选用１５头怀孕母猪在临床前第７ｄ和第３ｄ用药，观察对水肿病的预防效果。结果显示猪水肿抗毒注射液（抗溶血性大肠杆菌ＩｇＹ）按推荐剂量通过母猪临产前第７ｄ和第３ｄ两次肌注给药，对仔猪水肿病的预防保护率达９４．１２％；发病仔猪一次肌注给药的有效率为９６％，治愈率为９２％，均优于其它药物，配合尖峰抗肿注射液和猪康宁注射液肌肉注射的有效率达９８％以上。
（二）防治小牛致死性伤寒沙门氏菌感染
ＹｏｋｏｙａｍａＨ等给鸡注射犊牛沙门氏菌疫苗，免疫后收集鸡蛋制备高免卵黄抗体粉，测得抗都柏林沙门氏菌的效价为１∶５０００，抗鼠沙门氏菌的效价为１∶１０００。该抗体用于试验，将提取的抗体干粉溶解在牛乳中，用奶瓶喂给犊牛，实验结果表明，给予效价为１∶１０００和１∶５００的抗鼠沙门氏菌抗体的犊牛死亡率为３３％，１∶２５０或小于１∶２５０的均为１００％；给予效价为１∶２５００和１∶５０００的抗都柏林沙门氏菌抗体的死亡率分别为４０％和０；对照组的死亡率为１００％。随着卵黄抗体滴度的升高，犊牛出现腹泻和高热的时间延迟，且程度较轻，粪便中检出细菌数少，临床反应与抗体滴度呈现良好的量效关系。研究提示该卵黄抗体虽不能１００％治愈该病，却可以大大降低死亡率。
（三）防治轮状病毒性腹泻
德国１９９５年６月批准的Ｋ８８、Ｋ９９、９８７Ｐ大肠杆菌及轮状病毒的多价多联蛋黄抗体喷雾干粉，按５％添加于日粮内，预防仔猪大肠杆菌病即腹泻，有明显效果。日本用羟丙基纤维素（ＨＰＭ－ＣＰ）制备的抗Ｋ９９及轮状病毒的特异性蛋黄抗体ＷＳＦ喷雾干粉在预防犊牛腹泻上有明显成效。
（四）防治家禽病毒病
目前，抗传染性法氏囊病、抗鸡新城疫、抗鸭病毒性肝炎、抗小鹅瘟、抗番鸭细小病毒、抗鸡减蛋综合征卵黄抗体等在养禽生产上被应用。此外还有抗鸡脑脊髓炎病、抗鸡病毒性关节炎、抗鸡传染性喉气管炎高免卵黄抗体。范玉芳等选择临床无白痢的鸡场分别用来自１１个发病鸡场的法氏囊病强毒制备灭活苗，皮下接种，２．５ｍｌ／只，每１０ｄ接一次，直到抗体达１∶１２８以上时，收集高免蛋，供制备卵黄液，并经无菌及安全检查合格备用。试验表明，注射后１２ｈ鸡体内开始有抗体，并在体内维持５～７ｄ，第８ｄ全部转阴。应用该抗体早期预防对缺乏母源抗体的雏鸡可提高被动免疫水平，早期应用０．５ｍｌ／只的剂量可起到预防、紧急治疗作用，治疗幼鸡总有效率为９１％以上。王泽霖等的研究也显示出相同的结果。王永山等选择健康的开产蛋鸡１００只，分别注射ＩＢＤ细胞培养苗和ＮＤ－Ⅰ系苗，间隔１０ｄ，共免疫３次，最后一次免疫１周后收集高免蛋，制备了抗ＩＢＤ、ＮＤ的二联抗体，ＩＢＤ－ＡＧＰ为１６，ＮＤ－ＨＩ为６４。选择临床确诊为ＩＢＤ和ＮＤ混合感染且有临床症状的鸡２００只，其中１００只为治疗组，注射卵黄抗体，另一组１００只作对照。结果是治疗组的保护率７１％，死亡率为２９％，对照组病死率为７０％，治疗组和对照组的差异十分显著。当鸡群发生脑脊髓炎（ＡＥ）后，肌肉注射抗脑脊髓炎卵黄抗体（效价１∶１６以上），同时在饮水中添加抗菌素，鸡群死亡率为６．４％，而不用任何药物治疗的鸡群死亡率为１４．２％。试验显示抗ＡＥ卵黄抗体与病毒灵、抗菌素有良好的协同效应。张英等对试验鹅用小鹅瘟强毒尿囊液间隔１０ｄ两次皮下接种，首次为１００倍稀释。２ｍｌ／只，第２次原液注射２ｍｌ／只。第２次免疫后１０ｄ至２个月，收集免疫鹅所产的蛋，制备卵黄抗体，推广预防和治疗、紧急治疗，预防保护率为９０．８％，治愈率为９５．２％。研究表明，应用卵黄抗体治疗ＤＶＨ的疗效取决于卵黄抗体的中和效价及治疗时间，卵黄抗体的中和效价达２８．５以上，治疗的最佳时间应在ＤＨＶ进入鸭体后的２８ｈ内。抗体效价在２８．５以下，若错过最佳治疗时机或超过３６ｈ，则治疗效果极差。卵黄抗体治疗ＤＶＨ的效果与病毒的量也有密切的关系。同样是中和效价为２８．５的卵黄抗体，当接种ＤＨＶ强毒的量是１万倍ＬＤ５０时，卵黄抗体的保护率是１００％，而接种量是１０万ＬＤ５０时，相同的卵黄抗体的保护率仅为３０％。雏鸭出现病毒性肝炎症状后，死亡非常快，即使使用效价为２１０．５的卵黄抗体，其治愈率也仅为３０％。张毓金等针对当前流行于粤闽等番鸭养殖区的番鸭新病－“花肝病”，研制出抗番鸭花肝病高免卵黄抗体，试验表明该抗体预防和早期治疗作用很好，当番鸭群出现死亡时，则效果不是很理想，这可能与该病的潜伏期长有关。
（五）防治大肠杆菌和沙门氏菌病
鸡卵黄抗体和大肠杆菌混合物对大肠杆菌生长抑制作用的体外试验证明：鸡的抗大肠杆菌细胞壁膜的抗体可减弱或制止大肠杆菌培养平板上该菌的生长。在这一研究中，将已知浓度的鸡抗体加人到不同浓度的大肠杆菌培养物中，然后在室温中放置１．５ｈ，接着将含抗体和大肠杆菌的混合物添加到琼脂平板上于３５℃培养１８ｈ，结果观察到当每ｍｌ培养物添加０．２５ｍｇ抗体悬液时大肠杆菌的生长受到了抑制。鸡体内卵黄抗体的总量因鸡对病原体的接触量和接触程度的不同而不同。卵黄抗体防止大肠杆菌附着于肠细胞的这类特性，在抗沙门氏菌方面也得到了证实。在这一研究中，将抗沙门氏菌卵黄抗体与沙门氏菌和肠细胞一起培养。抗体添加量为１ｍｇ／ｍｌ时，附着于肠细胞的沙门氏菌数量减少了；当抗体添加量为１０ｍｇ／ｍｌ时效果最好。
（六）抗尿素酶
Ｐｉｍｅｎｔｅｌ和Ｃｏｏｋ（１９８８）、Ｐｉｍｅｎｔｅｌ（１９９１）等以被动免疫的方法证明了鸡接受抗尿素酶免疫接种后，其子代的生长率和饲料利用率都优于未接种母鸡的后代。Ｃｏｏｋ和Ｐｉｍｅｎｔｅｌ（１９９６）、Ｐｉｍｅｎｔｅｌ（１９９８）证明了口服鸡抗尿素酶抗体对鸡和猪性能的影响。若尿素酶受到了鸡抗体的抑制，那么胃肠道中氨的产生量就会减少。这样，节约下的能量就可用于生长；另一方面，鸡体在较少能量饲料的情况下可保持生长率。对商品肉鸡的试验结果表明，喂以不同浓度（２５ｍｇ／ｋｇ～２５０ｍｇ／ｋｇ）的抗尿素酶抗体的鸡，在体增重与饲料转化率方面有所改善。
（七）抗胆囊收缩素（ＣＣＫ）
给鸡饲喂抗ＣＣＫ抗体，饲料转化率明显改善，同时还可改善因采食含生大豆粉的饲料所引起的鸡采食量下降和饲料转化率降低等状况。
值得注意的是，通常蛋黄抗体的水平反映血清抗体的水平，但其升降情况通常较血清抗体的升降延迟６ｄ左右，ＮＤ、ＩＢＤ等免疫母鸡的卵黄抗体滴度与相应的血清抗体相同或稍高，差异不显著。但以免疫鸡蛋制备的抗禽霍乱卵黄抗体的效价比血清抗体出现的迟，而且水平低。因此凌育焱等建议不宜用产蛋母鸡制备抗禽霍乱卵黄抗体以防治该病，因为可能会出现抗体效价不高，防治效果不理想的后果。
（八）改善断奶仔猪的生长性能
王建明等研究表明，使用卵黄抗体添加剂可以有效地提高断奶仔猪的生长性能，其中以断奶后第一周的效果最明显。断奶后第一周的平均日增重、平均耗料量和饲料报酬分别提高７６．８％、１４．５％和３５．１％，全期（试验期１４天）的平均日增重、平均耗料量和饲料报酬也有同样的趋势，使用卵黄抗体添加剂的试验组比对照组分别提高２３．７％、１１．４％和１０．０％，说明了卵黄抗体添加剂明显促进断奶仔猪的增重和饲料转化。
（九）卵黄抗体在水产及其它方面的应用
毛宁等自病鳖体内分离到ＣＨ－１０８、ＳＧ－００１（嗜水气单胞菌Ａ．ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ），ＰＣ－００７（温和气单胞菌Ａ．ｓｏｂｒｉｏ），ＦＣ－００７（豚鼠气单胞菌Ａ．Ｃａｖｉａｅ）四株菌，并制备了四联菌苗，分３次给母鸡皮下注射，每次间隔１０ｄ，测得血清抗体效价达一定水平时，收集鸡蛋制备高免卵黄抗体，给试验病鳖注射，注射抗体后第２ｄ和第３ｄ仍有死亡。７ｄ后仍存活的病鳖病情好转，治愈率３６．６％，治疗效果有待提高，但其价格便宜，取材方便，可刺激机体的非特异性反应。给产蛋母鸡注射水稻白叶枯ＺＪ－１７３菌苗，收集高免蛋，制备针对水稻白叶枯菌的卵黄抗体，用于监测该病的发生，效果也很好。
总之，在提倡健康养殖和保护动物健康，保障畜禽产品安全，保障人类健康的今天，蛋黄抗体具有良好的开发和应用前景。对于蛋黄抗体以后的研究开发，主要应当着力解决抗原制备（敏感性、免疫方法）、高免蛋的生产（抗体滴度）、抗体提取与纯化（精制），以便更好的服务于生产。
