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细胞染色:吖啶橙

2008-06-25 22:15阅读:
吖啶橙:N,N,N',N'-tetramethylacridine-3,6-diamine
中文名:3,6-双(二甲基氨基)吖啶
英文名:Acridine Orange( AO),Euchrysine,3,6-Acridinediamine,Waxoline Orange A,Acridine Orange Base,Solvent Orange 15,Rhoduline Orange,Rhoduline Orange N,Acridine Orange NO,Rhoduline Orange NO,Basic Orange 14
分子式:C17H19N3
分子量:265.35 g/mol
CAS number:10127-02-3
外观:橙色、红棕色粉末
染色原理:
吖啶橙(AO)与双链DNA形成发绿色荧光的复合物。AO还可与单链DAN或RNA形成发红色荧光 的复合物。一个AO分子嵌入双链DNA的三个碱基对并发出最大波长为526nm(激发502nm)的绿色荧光。一个AO分子与单链DNA或RNA的一个磷 酸基相互作用形成聚集或堆叠的结构,此结构发出最大波长为650nm(激发460nm)的红色荧光。因此,AO用于被利用来检测双链DNA和单链DNA或 RNA。它使得用氩激光激发器或流式细胞仪同时测定DNA和RNA成为可能。
光谱数据:与DNA作用时和荧光素相似,激发最大波长502nm,发射最大525nm(绿光)。于RNA作用时,激发最大波长移动到460nm(蓝光),发射最大移动到650nm(红光)。
染色程序:
1. 用PBS或合适缓冲液制备10-50μ
M AO溶液。a)
2. 将1/10细胞培养基体积的AO溶液加入细胞培养基中。b)
3. 37℃下孵育细胞10-20分钟。
4. 用PBS或合适缓冲液洗涤细胞2次。
5. 用带有500nm激发和530nm发射滤光片的荧光显微镜观察细胞。
a) 由于AO可能具有致癌性,因此操作过程中须格外小心。
b) 可以用1/10浓度的AO缓冲液代替培养基。
储存条件:避光, 冷藏保存
参考资料:
1. http://en.wikipedia.org/wiki/Acridine_orange
2. http://www.dojindo.cn/
更多资料可见:
1. http://omlc.ogi.edu/spectra/PhotochemCAD/html/acridineorange.html
2. http://www.med.umich.edu/flowcytometry/PDF%20files/aostain.pdf
3. http://www.drbio.cornell.edu/Bio-Optical/exo_BMW/fl_labels/GranpH/AO.htm
4. http://probes.invitrogen.com/servlets/spectra?fileid=1301dna
P.S. 细菌经吖啶橙染色后,在紫外光显微镜下可观察到活细胞发出橙色荧光,而死细胞则发出绿色荧光。

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