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IHC、Western Blot、原位杂交、Elisa的区别

2013-01-29 13:48阅读:
有人问我。为方便解答,写个博客吧。反正很久都没写了。原话是“测RPE细胞中VEGF的表达趋势的,它写着用IHC、Western Blot、原位杂交还有Elisa四种方法检测,我就没弄明白,这需要做这么多吗?”
首先写免责条款。对于这四项技术,我最了解的是ELISA,其余三项内容都不是很了解。只是花费了15分钟,对自己进行了一下科普,然后又用了三分钟研究什么是VEGF和RPE细胞。所以,我的理解和回答都有可能出现偏差和错误,仅供参考。
RPE细胞的全称是视网膜色素上皮细胞,似乎以这个细胞做模型的人很多。随便一搜,论文、求购信息等等都出来了。
VEGF的全称是血管内皮生长因子,这东西,看到中文名称后,我终于想起来,自己稍微了解一些。肿瘤在生长过程中,首先要给自己建立血液循环通道,所以大量表达这个因子,让肿瘤附近血管密布。有一些大型药厂以此为突破点,希望寻找一个合适的靶向药,阻止肿瘤血管生成,治疗(抑制)肿瘤。又看了一眼度娘百科,告诉我:血管内皮细胞生长因子基因由8 个外显子和7个内含子组成,定位于染色体6p21.3,由于外显子剪切的不同而形成不同的亚型。其中VEGF121、VEGF165和VEGF189在人类表达。
好了,开始正文:
1.IHC Immunohistochemistry,要是告诉我中文名称“免疫组化”,我会恍然大悟的说“哦,久闻大名。”度娘百科告诉我,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。
2.Western Blot,免疫蛋白印记,Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如 硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的 抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经
过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测 蛋白水平的表达。
3.原位杂交,将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交,称为原位杂交。FISH的基本原理是将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上,再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.FISH具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核。
4.ELISA,酶联免疫吸附法,指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上,进行免疫反应的定性和定量方法。
把这四个技术的定义和简要说明,放在一起,就能很明了的回答这个问题了。
首先是原位杂交,这个是针对核酸进行检测的,可以看到VEGF是否转录成了RNA,这些RNA到了什么地方?但是,转录成mRNA,一定会表达成蛋白吗?如果你觉得转录mRNA一定会表达蛋白,请把《分子生物学》再读一遍。没关系,别觉得不好意思,我上个月就是用了一周时间,把这本书通读了一遍。
其次是WB,表达成了蛋白,表达的是什么蛋白?“血管内皮细胞生长因子基因由8个外显子和7个内含子组成,定位于染色体6p21.3,由于外显子剪切的不同而形成不同的亚型。其中VEGF121、VEGF165和VEGF189在人类表达。”不同的亚型,对应不同蛋白,是否都表达了?还是只表达了某几种?
然后是免疫组化IHC,这些蛋白都跑哪里去了?是在细胞质,还是在细胞膜,还是分泌出去了?那么我们做一个IHC,在显微镜下看看吧。
最后是ELISA,这些蛋白表达了多少?我想知道定量结果怎么办?表达的量和什么条件相关?那么我们做成一个试剂盒,测一下吧。
网上看了一下别人所写的区别。比较抽象,不知道我拿着你的问题举例子,能否明白?
在发布之前,我点击了一下“自动匹配标签”,结果网站给这篇文章添加的标签为“不知道”、“是什么”。好吧 IHC、Western <wbr>Blot、原位杂交、Elisa的区别

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