新浪博客

酶制剂在水产饲料中的应用

2012-10-11 18:29阅读:
1、前言
酶是生物细胞原生质合成的一类具有高度催化活性的蛋白质,广泛分布于动物、植物和微生物体内,在机体生长发育和繁殖等生命过程中起着非常重要的作用。
二十世纪八十年代后期,国外开始广泛使用饲料酶,九十年代美国、芬兰的一些饲料酶产品先后进入中国市场,从此我国开始饲料酶的研究与应用,目前饲用酶制剂在畜禽养殖业应用已非常普遍,水产养殖业也有一些应用酶制剂的报道。
2、水产饲料中应用酶制剂的必要性及人们对水产饲料使用酶制剂存在的疑问
2.1 水产饲料中使用酶制剂的必要性

图1 鱼对饵料的消化利用率
图1显示了鱼采食了饵料后,营养元素氮和磷在身体内的存留率和排除率。从图上我们可以看出鱼所采食的饵料中氮的存留率仅为30%,磷的存留率仅为32%,大部分的营养物质都以可溶的和不可溶的形式排泄到水体中。研究表明,水产养殖过程中来自水产动物粪便对水体的污染,远严重于畜、禽粪便对畜舍的污染,水产动物粪便中未消化饵料对水体的污染是已消化饵料的4倍;而水体的净化是水产养殖可持续发展的重要保障,即:“养鱼,先养水”。因此,提高饵料消化率,减少水体污染,意义比畜禽更为重大,尤为重要。
什么原因造成了鱼对饲料中的营养物质消化利用率低的呢?分析主要存在以下两个方面的原因。
(1)饲料中的抗营养因子含量较高 水产饲料一方面为高蛋白饲料,常用大量的棉、菜粕、等非常规原料。而这些非常规原料较粗,非淀粉多糖(NSP)等抗营养因子含量远高于常规原料,导致蛋白消化率低和损伤消化道。另一方面,水产饲料配方中都采用一定量的面粉、次粉作粘结剂等植物原料。而面粉、次粉等是小麦加工的产品或副产品,因而含有小麦的抗营养因子——阿拉伯木聚糖,是常见原料中,水溶性非淀粉多糖(NSP)含量较高的原料之一;有些原料中粗纤维含量高,产生屏障性抗营养作用。第三个方面是所有植物性饲料原料中,磷的贮存形式多数是有机磷——植酸,由于水产动物本身不能分泌植酸酶,因此造成这些磷不能利用,同时植酸还能螯合其他的营养物质,因此要在饲料中补充无机形式的磷酸二氢钙来满足动物的生长、生产和繁殖需要。这样一方面由于植物性原料中的磷无法利用,排放到水体中造成水体污染,另一
方面补充无机磷增加了饲料成本增加。表1显示了一些常规和非常规饲料原料中的抗营养因子含量。表2显示了一些饲料原料中总磷和植酸磷的含量。
表1 饲料原料中抗营养因子含量
原料名称
总非淀粉多糖,‰
水溶性多糖,‰
非水溶性多糖,‰
纤维素,‰
木聚糖,‰
葡聚糖,‰
甘露聚糖,‰
半乳糖,‰
玉米 8.2%
109
11
73
25
56
12
3
5
玉米 7.8%
109
11
73
25
56
12
3
5
小麦 13.9%
125
30
77
18
83
12
3
4
次粉 15.4%
231
82
127
22
149
33
8
7
次粉 13.6%
231
82
127
22
149
33
8
7
小麦麸 15.7%
424
45
299
80
271
46
5
9
小麦麸 14.3%
424
45
299
80
271
46
5
9
大麦(裸)
-
53
85
12
49
79
5
3
大麦(皮)
-
58
111
38
89
68
4
3
碎米 10.4%
8
-
-
3
2
1


米糠 12.8%
218
-
-
112
85
0
4

米糠粕 15.1%
244
-
-
125
95

4.5

黑麦
132
-
-
15
89
20
3
3
全脂大豆 35.5%
217
69
99
50
51
6.9
14.6
43
豆粕 43%
252
79
115
58
60
8
17
50
棉粕 47%
292
67
132
93
130
3
6
10
棉粕 43.5%
292
67
132
93
130
3
6
10
葵花粕



180
110

5.7

菜籽饼 35.7%
217
48
112
57
72
11
6
23
菜粕 37%
231
60
116
55
66
19
7
21
玉米蛋白粉 63.5%
33
6
18
9
12
8
2
0
玉米蛋白粉 51.3%
33
6
18
9
12
8
2
0
玉米蛋白粉44.3%
33
6
18
9
12
8
2
0
玉米蛋白饲料 19%
365
36
248
81
176
5
5
20
DDGS
349
85
194
70
163
44
11
8
亚麻仁粕
308
140
117
51
115
39
4
27
棕榈粕
485
33
373
79
51
8
314
15
椰子粕
454
41
352
61
26
6
318
24
注:-表示暂无此数据。数据来源:广东溢多利生物科技股份有限公司研发中心
表2 常用饲料原料中总磷和植酸磷的含量
饲料原料
总磷,g/kg
植酸磷,g/kg
植酸磷占总磷比例,%
玉米
2.62
1.88
71.60%
小麦
3.07
2.19
71.60%
大麦
3.21
1.96
61.00%
高梁
3.01
2.18
72.60%
木薯
0.97
0.38
39.20%
稻谷
3.55
2.47
69.60%
大豆
5.42
2.91
53.60%
豆粕
6.49
3.88
59.90%
去皮大豆粕
8.13
1.94
23.90%
棉粕
10.02
7.72
77.10%
菜粕
9.72
6.45
66.40%
向日葵仁粕
11.93
7.78
65.20%
花生仁粕
5.64
2.39
42.40%
芝麻粕
11.96
3.93
32.90%
玉米蛋白饲料
9.04
4.12
45.60%
玉米蛋白粉(63)
4.46
2.77
62.10%
玉米蛋白粉(51)
4.23
0.67
15.80%
DDG
6.68
6.12
91.60%
DDGS
2.66
1.57
59.00%
干啤酒糟(27.9)
6.62
4.68
70.70%
啤酒干酵母(45)
14.03
9.57
68.20%
米糠
17.82
14.17
79.50%
小麦麸
10.96
8.36
76.30%
次粉
10.84
8.06
74.40%
糙米
3.57
2.03
56.90%
数据来源:《中国饲料成分及营养价值表》_2010年第21版
(2)水产动物消化能力不足 水产动物的消化道存在以下几个方面的缺陷,造成水产动物对饵料的消化能力不足。水产动物消化道比较短,食糜存留时间短;草食或杂食性鱼类胃肠分化不明显,没有真正的胃及胃液分泌,蛋白酶等分泌不足;消化道中几乎没有非淀粉多糖酶(木聚糖酶和纤维素酶等)的分泌;肠道细菌较少,对纤维素几乎不消化;投喂开口饲料阶段,由于代谢活动均较低,酶系不健全,不易满足生长发育的营养需求。
通过在饲料中添加外源酶制剂,通过生物学的方法来降解抗营养因子,消除其对水产动物消化吸收的阻碍作用。同时,增加水产动物消化道内的消化酶,强化消化,弥补水产动物自身消化能力的缺陷。使用酶制剂可以降低水体中含氮、磷有机物的含量,从而从源头上减少了氨氮和磷的产生。
2.2 人们对水产饲料中应用酶制剂存在的疑问
很多研究都表明,在水产饲料中使用酶制剂可提高水产动物对饵料的消化利用率,改善动物的健康状况,但目前酶制剂在水产动物饲料中的使用仍不如畜禽动物饲料中普遍,分析具有以下几个方面的疑问。
(1)水产动物属于变温动物,饲料中添加的酶制剂是否能在较低温度下发挥作用?
(2)水产动物多数没有胃,消化道环境pH值接近于中性或偏碱性,饲料中添加的酶制剂是否能在这种环境中发挥作用?
(3)水产动物饲料均为高温制粒的,所添加的酶制剂能否耐受高温制粒呢?如果是液体酶,在水中的溶解性怎样?
2.3 水产饲料中应用酶制剂存在问题的解决
(1)从内源性消化酶的最适温度与环境温度的比较来看,无论是蛋白酶,还是淀粉酶,最适温度均高于鱼所生活的环境温度,蛋白酶的最适温度均为55~60℃,淀粉酶最适温度40~45℃。鱼类所处的水环境温度一般不超过34℃。因此,水环境温度难以达到鱼类消化酶的最适温度,一般都明显低于酶所需的最适温度,但鱼类仍然可消化一部分饵料。而饲料中添加的酶制剂的在温度方面的酶学性质是与动物体内酶相似的。
(2)关于消化道pH值问题,溢多利公司研发中心经研究发现,鱼的消化道pH值实际跟采食饵料后的食糜pH值是有差异的,如无胃鱼消化道pH值是6.2~9.5,但是,消化道中的食糜pH值是5.5~7.0;有胃鱼可以分泌一定量的胃酸,消化道pH值3.5~7,但是,消化道中的食糜的pH值是5~6。而酶制剂是在食糜中发挥作用,不是在消化道中发挥作用。
针对以上这两个方面,因此水产动物饲料中选用酶制剂一定要符合动物的生长发育及其消化规律(与内源酶特性相互吻合),或者说应该与动物的消化吸收相匹配。过多或过少都不利于动物的正常生长。请见图2和图3溢多利公司几种酶制剂的酶学性质。
(3)关于水产饲料高温制粒酶制剂耐受性方面,目前有两种解决方案,一是通过微生物自然诱变技术和基因工程技术改变微生物细胞内产酶制剂的基因,使得酶制剂发酵出来之后就有耐温性能,在这方面溢多利公司研发中心也取得了重大进展;二是通过在颗粒饲料表面后喷涂液体酶制剂避免高温对其破坏作用。我司研发中心通过试验研究,液体酶制剂喷涂到颗粒饲料表面后,随之饲料在水中时间的延长,酶制剂会溶解到水中,但是在半个小时之内溶解的量非常小,不会影响采食后的效果。

图2 溢多利水产植酸酶在不同温度和pH值下的酶活性

1
2
3
4


















注:1和3为木聚糖酶,2和4为甘露聚糖酶
图3 溢多利公司木聚糖酶和甘露聚糖酶在不同温度和pH值下的酶活性
3、酶制剂在水产饲料中的应用效果
3.1 植酸酶在水产饲料中的应用效果
植酸酶在水产饲料中的应用,也有很多研究者做了这方面的研究,取得了一定的效果,如表3、4、5、6、7。溢多利公司研发中心的研究表明(2008),水产饲料中添加水产植酸酶(2000 U/g)200 g/t,可使水产饲料中磷酸二氢钙的添加量减少4~6 kg/t(基础量为15kg/t饲料),而不影响水产动物的生长和生产,同时对饲料中总磷的消化利用率具有提高作用;罗非鱼饲料中直接添加植酸酶,对鱼的增重、营养物质消化率和消化酶活性具有改善作用(姚瑞清等,2008)。南美白对虾饲料中添加植酸酶,对虾的增重率具有提高的作用,粪便中的磷含量具有下降的作用(周萌等,2004)。
表3 水产植酸酶替代磷酸二氢钙对鲤鱼生长性能和营养物质表观代谢率的影响
指标
对照组
试验1组
试验2组
试验3组
初始重,g
35.31±0.21
35.4±0.13
35.30±0.12
35.33±0.20
终末重,g
63.41±1.52
63.76±1.64
64.23±1.24
62.10±1.40
存活率,%
97.8
99
100
100
增重率,%
79.58
80.11
81.95
75.77
饲料系数
2.77±0.07
2.75±0.02
2.79±0.06
2.74±0.01
生物学综合评定值
100
100.5
102.2
97.36
干物质消化率,%
70.35±0.66
70.89±1.13
70.60±1.83
70.14±0.69
粗蛋白消化率,%
80.54±0.33
84.65±0.89
84.87±0.79
82.94±1.37
总磷消化率,%
40.3±0.33
40.2±0.24
40.5±0.32
39.2±0.36
试验地点:溢多利公司试验基地;试验1组:在对照组基础上(15kg磷酸二氢钙)-6kg磷酸二氢钙/t+0.2 kg水产植酸酶/t;试验2组:在对照组基础上-6 kg磷酸二氢钙/t+0.15 kg水产植酸酶/t;试验3组:在对照组基础上-6 kg磷酸二氢钙/t+0.1 kg水产植酸酶/t。
表4水产植酸酶替代磷酸二氢钙对罗非鱼生长性能和营养物质表观代谢率的影响
指标
对照组
试验1组
试验2组
初始重,g
2.48±0.21
2.50±0.14
2.54±0.12
终末重,g
6.89±0.52
6.99±0.21
6.92±0.36
平均日增重,g
0.21±0.02
0.22±0.01
0.21±0.02
死亡率,%
15.55±3.85
13.33±3.33
11.11±7.70
干物质表观消化率,%
63.97±1.33
64.78±2.12
64.35±1.47
粗蛋白表观消化率,%
89.72±0.86
89.39±0.72
89.67±0.29
总磷表观消化率,%
52.58±2.82a
55.37±4.89a
58.02±1.73b
试验地点:浙江大学宁波理工学院水产动物营养实验室;试验1组:在对照组基础上-3 kg磷酸二氢钙/t+0.2 kg水产植酸酶/t;试验2组:在对照组基础上-6 kg磷酸二氢钙/t+0.2 kg水产植酸酶/t
表5 水产植酸酶替代磷酸二氢钙对鲫鱼生长性能和营养物质表观代谢率的影响
指标
对照组
试验1组
试验2组
试验3组
初始重,g
19.31±0.21
19.40±0.13
19.30±0.12
19.33±0.20
终末重,g
47.41±1.52a
48.76±1.64a
46.23±1.24a
42.10±1.40b
存活率,%
96.53±1.15a
95.83±1.29a
91.53±2.28a
86.5±1.29b
增重率,%
145.5
151.3
139.5
118.1
饲料系数
1.77±0.07a
1.73±0.02a
1.79±0.06a
2.14±0.01b
生物学综合评定值
100
102.15
96.57
89.19
干物质消化率,%
73.35±0.66a
74.89±1.13a
72.60±1.83a
70.14±0.69b
粗蛋白消化率,%
89.54±0.33a
89.65±0.89a
87.87±0.79a
83.94±1.37b
粗脂肪消化率,%
95.09±1.18a
93.47±1.53a
93.54±0.46a
89.97±1.17b
总磷消化率,%
40.3±0.33b
43.2±0.23a
41.5±0.24b
38.3±0.37c
试验地点:溢多利公司试验基地;试验1组:在对照组基础上(15kg磷酸二氢钙) -4kg磷酸二氢钙/t+0.2 kg水产植酸酶/t; 试验2组:在对照组基础上-6 kg磷酸二氢钙/t+0.2 kg水产植酸酶/t;试验3组:在对照组基础上-8 kg磷酸二氢钙/t+0.2 kg水产植酸酶/t。
表6 植酸酶对奥尼罗非鱼生长、表观代谢率和消化酶活性的影响
指标
对照组
试验1组
试验2组
试验3组
试验4组
初始重,g
15.35±0.40
15.54±0.17
15.63±0.08
15.41±0.42
15.54±0.17
终末重,g
46.69±1.29b
48.63±1.79ab
50.95±2.46a
51.26±1.93a
49.31±1.11ab
增重率,%
204.11±5.75b
212.95±14.27ab
225.97±16.13a
232.82±12.76a
217.29±6.39ab
干物质消化率,%
40.40±1.66b
44.02±2.74a
45.32±1.81a
44.69±0.37b
43.17±0.46ab
粗蛋白消化率,%
77.33±1.31
78.19±2.37
78.70±1.52
78.06±0.69
77.45±2.34
总磷消化率,%
34.47±1.91d
38.72±1.06c
40.88±0.63bc
42.20±2.84b
47.93±1.40a
蛋白酶,U/g
1264.70±160.45b
1358.23±148.73ab
1540.60±227.16a
1383.05±112.53ab
1281.63±134.29ab
淀粉酶,U/g
500.90±57.96c
617.28±78.51ab
649.43±64.16a
553.64±58.65abc
531.74±57.01bc
脂肪酶,U/g
12.47±2.28
14.41±1.42
13.66±1.45
12.24±2.02
13.62±2.38
对照组:1%磷酸二氢钙,试验1、2、3、4组:在对照组基础上分别添加500、1000、1500、2000U/kg的植酸酶(姚瑞清等,2008)。
表7 植酸酶对南美白对虾生长及磷利用率的影响






注:对照组既不加植酸酶也不加Ca(H2PO4)2;40天的养殖试验(周萌等,2004)。
3.2 木聚糖酶等非淀粉多糖酶在水产料中的应用效果
除植酸酶外,木聚糖酶等非淀粉多糖酶在水产饲料中的应用效果,也有很多学者做了这方面的研究,如表8、9、10、11。在尼罗罗非鱼饲料中添加木聚糖酶,显著提高鱼的增重率和总消化吸收率及蛋白质消化吸收率,显著减低饲料系数;饵料中添加非淀粉多糖酶对罗非鱼的特定生长率、饵料系数等均有显著影响(P<0.05),0.02%组和0.04%组的特定生长率比对照组分别提高10.61%和11.36%,0.02%组和0.04%组的饵料系数比对照组分别降低16.13%和18.99%;罗非鱼饵料中添加非淀粉多糖酶显著降低了水中氨氮含量,提高了水中溶氧量(溢多利,2005)。选择155 g左右的鲤鱼270尾,实验期75 d。结果表明:在鲤鱼饵料中添加酶制剂对增重(P<0.01)、饵料系数(P<0.05)有极显著和显著影响,而对摄饵量、养殖期间和运输成活率没有影响(溢多利,2006)。
王纪亭等(2006)研究表明在罗非鱼饲料中添加液体复合酶,明显提高了增重率及蛋白质、钙、磷等营养物质的消化利用率。在草鱼饲料中添加液体复合酶,不但对草鱼的生长性能和饲料消化利用率具有明显的改善作用,而且的免疫性能也具有明显的改善作用(王纪亭等,2009)。
阎有利等(1994)在鲤鱼饲料中添加酶制剂,其试验组增重率比对照组提高11%,饲料系数降低了16.36%。 将β-葡聚糖酶和木聚糖酶分别加入到鲤鱼的大麦和小麦饲料中,测定其对鱼的生长性能、饲料消化率及某些相关生化指标的影响。结果表明,大麦饲料中添加β-葡聚糖酶,小麦饲料中添加木聚糖酶,鲤鱼的相对增重率分别提高了18.62%和15.6%(P< 0.05),饵料系数分别降低了5.6%和4.9% (P<0.05),饲料干物质、粗蛋白、粗脂肪的消化率均显著提高(P<0.05)。
表8 木聚糖酶对尼罗罗非鱼生长性能的影响
指标
对照组
试验1组
试验2组
试验3组
初始重,g
32.65±4.16
31.66±3.65
32.08±3.00
37.33±2.12
终末重,g
82.31±7.13c
94.75±5.40b
107.00±1.14a
104.60±9.79a
存活率,%
100
100
100
100
增重率,%
153.7±25.3c
200.5±17.1b
235.4±31.2a
180.34±23.4b
饲料系数
1.71±0.17a
1.24±0.05bc
1.17±0.06c
1.40±0.01b
蛋白质效率
1.58±0.16c
2.18±0.08a
2.33±0.11a
1.94±0.13b
试验地点:溢多利公司试验基地;试验1、2、3组:分别在对照组基础上添加木聚糖酶(10000U/g)50、100、150g/t。

表9复合酶对奥尼罗非鱼生长性能和饲料消化率的影响
指标
对照组
试验1组
试验2组
试验3组
初始重,g
60.6±2.33
61.5±2.15
60.4±2.26
61.2±2.39
终末重,g
126.7±2.50a
130.2±5.93a
136.5±6.42b
139.4±4.24b
平均耗料量,%
184.7±6.61b
181.1±2.00b
178.3±4.77a
176.5±2.29a
特定生长率,%
1.18±0.02a
1.23±0.07a
1.36±0.09b
1.39±0.04b
饵料系数
2.79±0.12c
2.64±0.13b
2.34±0.15a
2.26±0.06a
总表观消化率,%
54.11±1.01a
56.76±1.57b
58.67±0.22bc
59.48±0.20c
粗蛋白消化率,%
78.6±0.42a
80.7±0.26b
80.25±0.29b
81.29±0.16c
粗脂肪消化率,%
83±2.38
82.25±2.01
81.72±1.80
82.88±0.98
粗纤维消化率,%
9.23±1.56a
10.58±5.12ab
11.48±4.29ab
16.17±4.32b
钙消化率,%
32.03±5.03a
35.91±0.90ab
37.78±3.97ab
40.18±1.01b
磷消化率,%
56.1±1.61a
58.61±0.52ab
58.56±2.28ab
59.98±1.96b
试验1、2、3组:分别在对照组基础上添加液体复合酶100、200、400 ml/t(王纪亭等,2006)。
表10 复合酶对鲤鱼生长性能的影响
组别
初始重,g
终末重,g
摄饵量,g
增重,g
饵料系数
1
156.20
405.35
478.38Aa
249.16ABCb
1.92ABb
2
158.31
411.33
478.19Aa
253.01ABCb
1.89ABab
3
155.35
424.22
483.95Aa
268.87Aa
1.80Aa
4
162.32
421.29
486..88Aa
258.98ABCab
1.88ABab
5
157.36
403.32
479.50Aa
245.95ABCbc
1.95ABb
6
159.23
398.21
475.60Aa
238.98Cc
1.99ABb
试验地点:溢多利公司试验基地;试验1、2、3、4、5、6组:分别饲喂含复合酶制剂0、300、500、700、900、1100 g/t的饵料;数字右肩上的字母大写都不相同者表示差异极显著(P<0.01),大写字母有相同者但小写字母皆不同者表示差异显著(P<0.05)。
表11 复合酶对草鱼生长性能、饲料消化率和免疫力的影响
指标
对照组
试验1组
试验2组
试验3组
初始重,g
31.56±0.34
31.47±0.38
31.69±0.45
31.33±0.51
终末重,g
66.83±1.54a
70.14±2.43ab
73.62±2.51b
72.97±1.95b
相对增重率,%
111.76±3.85a
122.88±4.36ab
132.31±2.80b
132.91±3.24b
特定生长率,%
1.53±0.05a
1.64±0.06ab
1.72±0.08b
1.73±0.11b
饲料系数
1.53±0.11a
1.39±0.09ab
1.29±0.12b
1.30±0.08b
干物质消化率,%
51.35±1.20a
53.84±1.08ab
56.69±1.10b
56.78±1.13b
粗蛋白消化率,%
78.63±1.54a
80.44±1.43ab
82.53±0.95b
82.18±1.37b
粗脂肪消化率,%
80.21±1.25a
82.01±1.36ab
84.96±1.32b
85.06±0.02b
粗纤维消化率,%
10.74±1.15a
11.34±1.36ab
12.78±2.80b
12.60±2.80b
白细胞吞噬率,%
22.3±0.7a
28.1±0.9a
39.7±1.1b
43.2±1.2b
白细胞吞噬指数
1.13±0.08a
1.28±0.07a
1.59±0.07b
1.76±0.09b
血清杀菌率,%
4.7±0.35A
1.51±0.54B
27.7±2.8C
35.2±3.2D
试验1、2、3组:分别在对照组基础上添加复合酶300、600、900 g/t(王纪亭等,2009)。
4、结束语
随着技术的发展水产饲料中酶制剂的使用量将越来越大,笔者认为目前水产饲料中酶制剂应该向以下几个方向发展。
(1)研究更加适合在水产动物这种体温变化动物中使用的酶制剂,使酶在较宽的温度范围内具有较高的活性。
(2)研究更加适合水产动物消化道无胃的环境中使用的酶制剂,使酶在较宽的pH范围内保持较高的活性。
(3)采用基因工程或天然育种的方法使得水产动物饲料中使用的酶制剂耐温性能大大提升,适合更高温度的制粒饲料。
以上这三个方面人们一直在努力,也取得了非常好的进展,如图4溢多利公司新研究的某酶制剂的耐温性能。期待在不久的将来能有更多适合水产饲料中使用的酶制剂,应用于水产养殖,对改善目前水产养殖中水体污染及饲料原料短缺提供有效的帮助。

图4 溢多利公司某酶制剂的耐温性能
水产养殖的飞速发展,既带来了巨大的经济利润,同时也产生了养殖水体的严重污染,饲料中未消化的氮、磷构成了养殖水体的主要污染源之一,因此提高饲料利用率,降低水体污染已成为水产养殖工作者今后努力的方向。
酶制剂作为一种新型环保绿色饲料添加剂,具有提高饲料消化吸收率,节约蛋白源,无毒、无副作用、无残留和无耐药性等优点,必将为推动水产养殖业的发展发挥重大的作用。

致谢:本文章是本人总结了溢多利多年来在水产酶制剂方面的研究成果而完成,有多位溢多利人在这方面不断的努力,对他们的努力工作表示感谢,对文中引用的一些学者的研究结果表示感谢!
参考文献(略)。
(本文完成于2012410日,载于溢多利特刊《溢风》2012总第59期)

我的更多文章

下载客户端阅读体验更佳

APP专享