人性别的鉴定 实验报告
2013-04-02 18:47阅读：
试剂盒试用报告
基本情况
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单位名称
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株洲市南方中学
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申请试剂盒名称
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人性别的鉴定
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申请渠道
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1.洛阳会议 2.朋友推荐
3.教研组织 4 网络
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试用背景：
写写您的试用背景，让我们了解您的实验条件，以便日后更好的为您服务。
1、有无生物新课标实验室？
2、有无相关仪器配备？
3、是否开展过相关实验？
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我们学校在2011年对实验室进行了改造，建成了新的实验室，高规格的配备了许多新的实验仪器，可以开展了许多学生自主探究实验。在川布兰的帮助下，我们开展了PCR的学生实验，现在我们想知道PCR仪的更多用途，所以申请了此实验试剂盒。
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试用过程与结果
实验名称：人性别的鉴定
实验仪器及实验材料：
PCR仪，微量移液器，带有毛囊的头发，人性别鉴定的试剂盒（包括Taq聚合酶，缓冲液，Mgcl2,dNTPS，引物I，引物II），电泳仪，琼脂糖凝胶
实验步骤（含操作过程照片）：
1、配制
预混液
首先打开试剂盒，取出PCR预混液的各种成分，放入离心机里离心数秒中。之后根据你所要求组数，计算所需各种组分的数量，配制成PCR预混液，再在0.5mL离心管中加入下列成分：
PCR预混合液
19μL
模版DNA
1μL
总体积
20μL
（见图一、图二）
2、每组拔取3根带有毛囊的头发（两男两女），剪下毛囊，分别放入0.5ml的离心管中，做好标记，取20μ已配好的预混液加入到离心管中，然后加入15μL液体石蜡
3、将离心管放人全自动基因扩增仪中，按照下列反应程序设定参数，进行扩增实验。（ 见图三）
循环过程
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温度
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时间
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循环次数
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预变性
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95℃
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30s
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变性
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95℃
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20s
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30次
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退火
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52℃
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20s
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延伸
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72℃
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20s
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保温
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72℃
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30s
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4、制作琼脂糖凝胶块
（1） 配胶
将50×电泳缓冲液稀释至1×电泳液冲液。取0.25g琼脂糖加到装有25mL
1×电泳缓冲液的150mL三角瓶中，瓶口用封口膜封住，在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖完全熔化。
（2）倒胶：把U型凝胶托盘放入制胶槽中，插好梳子，把配好的琼脂糖凝胶，倒入凝胶板，待凝固后，拔出梳子，把凝胶点样孔一端靠负极方向，放入电泳槽中。（见图四、图五）
5、点样：吸取PCR反应产物20μL转移到一个新离心管中，加入1μL 6×Loading Buffer
和1μL核酸荧光染料充分混合，取10μL加入点样孔内。
6、点样后盖好盖子，连接正负极，在80V恒压条件下电泳。电泳20分钟
（见图六）
注意事项：
加样不宜过多，以免跑不开电泳，一般20μL DNA中加入2μL染料和6×Loading
Buffer混合物混匀，取10μL加入点样孔；恒压电泳时把电流调到最大，恒压80V电压。
7、放在图谱观察仪观察
（见图七、图八）
实验结果（实验结果照片 见图九）：
有亮的条带是男的，没有条带的是女的
实验结果分析：
电泳之后，男的条带亮度有一根亮，另外一根不是很亮，可能跟取材有关，也可能点样的时候操作有误差。以后要多做几组，效果可能更明显。
使用试剂盒心得（使用试剂盒与传统配制试剂方法组织开展同一实验有何优势和不足）
方便，减轻了老师的工作量，也有利于节约实验材料，实验效果也很好。
京川布兰生物技术开发有限公司，专业从事中学生物实验室整体解决方案及试剂耗材，如果您有关于中学生物实验方面的任何问题随时与我们联系，全程服务，实验无忧。川布兰永远是您的朋友~！QQ961307997川布兰或电话18911199826
