细菌鞭毛染色法---镀银染色
2011-11-01 14:47阅读:
镀银染色法:1958年Rhodes根据Fontana的螺旋体改良镀银染色法,建立了一种细菌鞭毛镀银染色法。试剂分为媒染剂和银染剂。媒染液:10%单宁酸10 ml加5
ml饱和硫酸钾铝水溶液,再加1
ml苯胺饱和水溶液形成沉淀,通过摇动又能重新溶解,加入5�Cl3水溶液1
ml形成黑色溶液,稳定10
min后使用。银染液:配制5%AgNo3水溶液100
ml取出10
ml备用,再缓慢加入浓氨水(比重0.880)使形成的沉淀刚好重新溶解,最后把备用的10
mlAgNo3溶液向其中逐滴加入,直到摇动后呈现轻微而稳定的薄雾状溶液为止,避光保存,可稳定数周。用媒染液染片3
~
5min,蒸馏水充分洗涤后,再把银染液滴加至涂片上。加热至接近沸腾,染色
3~
5min。由于
Rhodes镀银染色法媒染液成分复杂、操作繁锁,所以
1965年
Blenden等改良了细菌鞭毛镀银染色法的配方。试剂
A:
100
ml蒸馏水中加入
5
g单宁酸,
1.5
gFeCl3,
15%福尔马林
2
ml,
1%NaOH溶液
1
ml。试剂
B:使用
2%
AgNo3,其他同于
Rhodes,但试剂不稳定,要求在
4h内使用,并用要用氨水调
pH至
10。试剂
A染片
2~
4min,试剂
B染色
30
s,不需加热。由于以上两种镀银染色方法都要使用
营养琼脂斜面培养物,并且需用无菌蒸馏水悬浮菌液制片,未采用评分法评价镀银染色方法。因此
1977年,
West等对镀银染色法进一步改良,制备涂片时直接使用血平板,评价染色效果首次使用
5分制,通过该评价方法证明了加热银染液染片可以提高染色效果。试剂配方:媒染液为饱和硫酸钾铝水溶液
25 ml,
10%单宁酸
50
ml,
5�Cl3水溶液
5
ml,
5℃保存,染色液配制同
Rhodes,但需避光
5℃保存。媒染液染片
4min,银染液滴加至涂片上加热至微冒蒸汽,染色
4min。同时
West等还对使用不同培养基进行染色效果评价,包括半固体动力培养基、
血琼脂平板、
TSA(
trypticase soy agar)斜面,其中半固体动力培养基和
TSA斜面
25℃,培养
18~
24h;血琼脂平板
35~
37℃,培养
18~
24h。评价结果血琼脂平板
35~
37℃,培养
18~
24h不适于细菌鞭毛染色,而半固体动力培养基和
TSA斜面
25℃,培养
18~
24h适合于细菌鞭毛染色,同时也证明了使用福尔马林处理标本制备涂片并不能有效阻止鞭毛脱落。由于镀银染色法媒染液不稳定,需避光
5℃保存,
1992年
Porter等继续改良该方法,其试剂配方同
West等的方法,只是媒染剂避光室温可保存数月,延长媒染剂染色时间为
8 min,染色液不需加热,只染
30 s,制备涂片程序略有不同。使用
TSA平板,
36℃培养
24h,但遗憾的是
Porter等只使用了
1种细菌(奇异变形杆菌)进行研究。于是
1994年
Finegan等进一步证实使用过期媒染剂进行镀银染色可以增强鞭毛染色效果,并使用
4种细菌(绿脓假单胞、奇异变形杆菌、黏质沙雷菌、枯草芽孢杆菌),用
trypitcase soy肉汤及其琼脂平板,
26℃培养
24h。试剂配方仍不变,媒染液放置
1、
2、
4、
8、
16周后进行染色,媒染液染色
8
min,银染液染色
30~
60
s,不需加热。这
4种细菌均染色成功,从而证明媒染液可至少放置
16周。
青岛海博生物技术有限公司(www.hopebiol.com),主要从事生物、微生物、检验用培养基等诸多方面的研究。公司现有产品:干燥培养基、显色培养基、常规检验培养基、药典培养基、植物组织培养基、运送培养基、临床检验培养基、动物疫苗培养基、一次性平板等。海博生物是您微生物检测和食品安全保障的最佳合作伙伴,能为您提供各类细菌培养整体解决方案!
详情请联系:0532-80925966
业务:QQ:863599080
邮箱:
haibo@hopebiol.com
青岛海博生物技术有限公司
www.hopebiol.com
主要从事生物、医学及相关领域的产品技术研究、开发和销售,涉及分子生物学、生物化学、医用诊断试剂以及各种微生物、检验用培养基等诸多方面。
海博生物技术有限公司现有产品:干燥培养基、显色培养基、常规检验培养基、药典培养基、植物组织培养基、运送培养基、临床检验培养基、动物疫苗培养基、一次性平板等
干燥培养基:有600多个品种,采用法国进口原料制作, 质量稳定、特异性好,并在不断开发新产品。
支原体培养基:由于质量稳定、特异性好,广泛用于全国各大医院和皮肤病专科医院,得到用户的一致好评。
显色培养基:生产金黄葡萄球菌显色培养基、大肠杆菌显色培养基、大肠菌群显色培养基、大肠杆菌和大肠菌群二合一显色、李斯特氏菌显色培养基、0157菌显色培养基、弧菌显色培养基、坂崎杆菌显色培养基等。
标准样品:经营2000多种国内外标准品,包括农药标准品,兽药标准品等。
生化试剂:经营多种生化试剂,品种齐全,质量保证。
详情请联系:0532-80925966
业务:QQ:863599080
邮箱:haibo@hopebiol.com