溶菌酶的简介
2013-09-05 17:32阅读：
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新型抗菌抗病毒免疫增强剂 兽药增效剂
易泰溶菌酶
易泰溶菌酶简介
一、溶菌酶的种类
1922年，英国细菌学家·弗莱明发现人的唾液、眼泪中存在溶解细菌细胞壁的酶，命名为溶菌酶（lysozyme）。又在1928年发现了青霉素，获得了诺贝尔奖，此后，人类又生产出了阿莫西林、头孢等抗生素。通过这几十年的使用与滥用，耐药菌株、超级细菌和病毒变种出现。这时才显示出了溶菌酶的重要性。
溶菌酶(Lysozyme)全称为1，4-β-N-溶菌酶，又称粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶。根据溶菌酶结构、分子量和来源的差异可分为：植物溶菌酶(plant
type
lysozyme)，微生物溶菌酶(bacteria
type lysozyme)，噬菌体溶菌酶(phage
lysozym
e)
以及3种动物型溶菌酶。
六十年代以来，溶菌酶广泛应用在食品、日化、医药、保健、保鲜等领域，体现出药理、保健、防腐三大功能；近年来，溶菌酶的抗菌抗病毒功能和免疫增强作用在畜牧生产领域得到认可并广泛运用。
易泰溶菌酶属于一种基因克隆酶，是将来源于健康动物体内的溶菌酶利用分子生物学技术进行基因重组，筛选优良菌种，通过生物发酵和先进提取工艺产生的一种水溶性溶菌（杀菌）蛋白酶，效价高于蛋清提取溶菌酶50～100倍。
细胞壁结构：
肽聚糖中的多糖链在各物种中都一样，而横向短肽链却有种间差异。革兰氏阳性菌细胞壁厚约20～80nm，有15-50层肽聚糖片层，每层厚1nm，含40~90%的肽聚糖，含20-40%的磷壁酸（teichoic
acid），有的还具有少量蛋白质。革兰氏阴性菌细胞壁厚约10nm，仅2-3层肽聚糖含10~30%，其他成分较为复杂，由外向内依次为脂多糖、细菌外膜和脂蛋白。肽聚糖是革兰阳性菌细胞壁的主要成分，凡能破坏肽聚糖结构或抑制其合成的物质，都有抑菌或杀菌作用。如溶菌酶，青霉素抑制转肽酶的活性，抑制肽桥形成。
易泰溶菌酶抗菌机理
细菌细胞壁由胞壁质组成，胞壁质是由 N-乙酰氨基葡糖
(NAG)和N-乙酰胞壁酸(NAM)交替组成的多聚物，胞壁酸残基上可以连接多肽，称为肽聚糖。肽聚糖是细菌细胞壁的主要成分，它是由NAM、NAG和肽“尾”(一般是4个氨基酸
)组成，NAM与NAG通过β-l,4糖苷键相连，共同组成了肽聚糖的多层网状结构，作为细胞壁的骨架，上述结构中的任何化学键断裂，皆能导致细菌细胞壁的损伤。1959～1963年通过大量研究，Salton等人证明溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖，其水解位点是N-乙酰胞壁酸(NAM)的l位碳原子和N-乙酰氨基葡糖(NAG)的4位碳原子间的β-l，4糖苷键，结果使细菌细胞壁变得松弛，失去对细胞的保护作用，最后细胞溶解死亡。G+细菌细胞壁几乎全部由肽聚糖组成（肽聚糖占组成的40～80%），没有由脂多糖、磷脂、糖脂组成的外膜覆盖，而G-细菌有外膜保护并且只有内壁层为肽聚糖（肽聚糖占组成的10～30%），因此，溶菌酶对于G+细菌效果突出（在临床应用中，粘杆菌素与溶菌酶联用对金色葡萄球菌、魏氏梭菌扩大了药物的效果），而对G-细菌作用稍差。当被溶解的糖苷键达到一定程度才能杀死细菌，溶解部分细菌也会减少或阻止外来有害菌毒素的释放与繁殖，达到抑菌效果，所以在我们做药敏实验室，不能达到像抗生素一样的明显效果。溶菌酶在胃酸及其消化酶的催化作用下，可以生成小肽进入血液。所以防止细菌耐药性的出现溶菌酶起到了很大的作用，净化耐药菌株好帮手。
1965年，David
Phillips和他的牛津同事等根据晶体学研究提出的底物结合方式和溶菌酶的催化作用机制，曾在各种化学实验中得到验证，生物催化作用使得溶菌酶的作用更具特色。
溶菌酶与有益菌的作用：
溶菌酶是在动物体内常在的物质，它和有益菌一样在生物进化过程中，在动物体内共生共融，在机体健康内维持着浓度平衡状态，在机体变化时也会出现变化，保持机体健康状态。在正常情况下在唾液中含量为0.7%的浓度，在有外来有害菌侵入时就会浓度变大，在酶和有益菌帮助下来水解有害菌。达到把有害菌杀死或抑制目的。
溶菌酶对耐药菌株的作用：
溶菌酶的作用机理细胞组成有关，只要符合溶菌酶水解的条件就行，只要细胞壁质有肽聚糖组成，就会对该外来有害细菌有效，作用大小和溶菌酶在体内条件下，与溶菌酶的浓度和有害菌肽聚糖的含量有关。
溶菌酶单独应用效果：
溶菌酶效果：肠道疾病的复发。
二、溶菌酶的特点
1、溶菌酶纯品为白色或者微白色结晶形或无定形粉末，无臭，味甜，易溶于水，不溶于丙酮、乙醚。
2、溶菌酶作用的适宜温度在35～50，最适温度37；溶菌酶适宜pH5.3~7.4，最适pH6.8，其水溶液在pH1.2~11.3之间是稳定的，不易被胃酸破坏。
3、溶菌酶不会因为有机溶剂的处理而失活，当转移到水溶液中时，溶菌酶的活力可全部恢复。
4、溶菌酶具有较强热稳定性，是已知最耐热的酶，在pH4~7时100条件下处理5分钟酶活仍然保持90%以上。在20.5％的乙醇中，在62.5下维持20min而不失活。同时，溶菌酶可被冷冻或干燥处理，且活力稳定。
5、经过修饰的溶菌酶（易泰微生物溶菌酶）的抗菌谱较广，不仅对G+
菌效果突出，对部分G-菌也有较好的抑杀作用，尤其对耐药菌效果更明显。
6、溶菌酶是一种天然蛋白质，无毒、无害、无残留、无耐药性，生物安全性高。符合绿色、安全、健康、环保的要求。1992年FAO/WTO
的食品添加剂协会已经认定溶菌酶在食品中应用是安全的。
7、溶菌酶与抗生素配伍使用能增效2~10倍，减少抗生素用量，有效控制药残。
8、溶菌酶是双歧杆菌等有益菌增殖因子。
三、溶菌酶活性测定
目前，国内外对溶菌酶活性的测定方法，主要有比浊法、紫外分光光度法、比色测定法、琼脂火箭糖电泳法和高效液相色谱法等，但上述各种方法中均存在一定的缺点，如比浊法干扰因素多，重复性差，对单个样品测定速度快；比色法操作简单但误差较大。因此，各种方法都在不停改进中。
传统方法测定溶菌酶活性时要将溶壁微球菌制成冻干粉，此过程不仅步骤烦琐而且易造成细菌大量死亡，影响结果。赵玉萍等向溶壁微球菌直接加保护剂(20％的甘油)置于普通冰箱冷冻，使用时解冻，读第1min的吸光度值和第2min的吸光度值即可。使溶菌酶的测定方法更加节约高效，准确性又好。同样，李德海等也采取了类似的方法。而苍金荣等采用聚苯乙烯微量反应板，建立了微量快速比浊检测溶菌酶的方法，使标本用量减少，反应时间缩短，灵敏度较好。近年来，许多报道采用标记乙二醇化几丁和0.1mol／L、pH4.5的醋酸—醋酸钠缓冲溶液作底物，在600nm下来测定吸光度变化的简便方法，也取得了很好的效果。
四、溶菌酶的主要功能
1、抗菌消炎
作为非特异性免疫的重要成员，溶菌酶在防御外源微生物入侵方面发挥着重要的作用，其在动物的免疫细胞和巨噬细胞中含量比较高。主要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，在渗透压作用下导致G+菌细胞壁破裂内容物逸出而使细菌死亡；在体内环境下，由于有分泌型lgA、补体等参与，溶菌酶还能水解某些G-菌；溶菌酶可与各种诱发炎症的酸性物质结合，使其失活，并能增强其它药物的疗效，改善组织基质的粘多糖代谢；提高内源性蛋白酶活性，促使抗菌多肽的产生；结合细菌脂多糖，减轻内毒素作用，对冬春易发的感染性疾病特别有效。
溶菌酶对革兰氏阳性菌、好气性孢子形成的菌、枯草杆菌、耐辐射微球菌均具有良好的分解作用，对大肠杆菌、普通变球菌和副血性弧菌等革兰氏阴性菌也具有溶解作用。因此，溶菌酶能够达到抗菌消炎、祛病强体、促进生长的目的。
2、抗病毒
溶菌酶能激活宿主的免疫系统，增强肿瘤细胞的免疫原性，从而具有抗肿瘤作用；溶菌酶是一种碱性蛋白质，在体内近于中性的pH环境下带有大量的正电荷，可与带负电荷的病毒蛋白直接作用，和DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐，使侵入体内的病毒失活；在被疱疹病毒感染的Hela细胞培养液中，加入溶菌酶后有抑制细胞的变性作用；溶菌酶可以抑制流感病毒和腺病毒生长，阻止疱疹病毒感染，可用于带状疱疹、腮腺炎、鸡水痘、肝炎及流感等病毒性疾患的治疗。可以预防和治疗病毒性肝炎，解除肿瘤或抗肿瘤治疗引起的免疫抑制；澳大利亚科学家（2000年）发现A型流感病毒引起的呼吸道感染与溶菌酶有关，感染致使支气管中性粒细胞功能受损，溶菌酶分泌减少，抗菌活性降低，导致呼吸道病原感染而致病。纽约大学的一组科学家（1999年）发现溶菌酶具有强烈的抗艾滋病功能。
3、增强免疫力
溶菌酶作为机体非特异性免疫因子之一，参与机体多种免疫反应，在机体正常防御功能和非特异性免疫中，具有保持机体生理平衡的重要作用：能够加强血清灭菌蛋白(Properdin)、γ-球蛋白(γ-globulin)等体内防御因子对感染的抵抗力；促使细菌细胞裂解，刺激免疫系统，激发机体内吞噬细胞的噬菌作用；溶菌酶本身具有T细胞表位，能诱导2型(Th2)T辅助细胞反应，口服溶菌酶能诱导小鼠产生全身性的Th1
和Th2免疫反应，增强2～4倍免疫功能；能够减少外来抗原的刺激，降低动物免疫激活负荷，从而减少某些生长抑制因子的浓度和活性，促进分解代谢物质释放量的减少和合成激素活性的提高，增强抗病力和生产性能。
4、调节肠道菌群平衡
研究表明，健康动物体内的菌群是相对稳定的，个体菌群的差异性影响着个体生长性能的差异。溶菌酶可对肠道微生物进行直接或间接调控起作用。对肠道微生物进行直接的调控作用是降低肠道内有害微生物，促进有益微生物的生长繁殖，维护肠道菌群有效的动态平衡，
降低机体维持和免疫应答对营养的需求；对肠道微生物的间接调控作用是降低免疫应答和亚临床疾病的发生，减少肠道的维持需要，降低霉菌毒素、氨、甲酚等有害物质对于机体免疫系统的损害，从而改善畜禽的生产性能。
5、修复创伤组织
溶菌酶还具有激活血小板的功能，可以改善局部组织血液循环障碍，分解脓液，修复创伤组织，增强局部防卫功能。
易泰溶菌酶作为一种新型抗菌抗病毒免疫增强剂，正在被更多的兽药组方师、饲料配方师和基层兽医人员认可使用，是作为畜禽、水产饲料添加剂在替代抗生素、控制耐药菌、增强免疫力、提高生产率、生产绿色安全食品的最佳选择；是作为抗生素增效剂、拓宽抗生素抗菌谱及效价、提高抗病毒能力和预防治疗混合感染的最新选择。
五、易泰溶菌酶抗菌谱
声明：一下抑菌圈是在模似肠道环境下进行的，所以在我们化验室里做不到一下结果。
易泰溶菌酶对兽医临床常见且危害较大17种致病菌的抑菌效果：
供试菌
|
抑菌圈（cm）
|
MIC50(μg/ml)
|
MIC90(μg/ml)
|
金黄色葡萄球菌
|
21
|
0.06
|
16.00
|
无乳链球菌
|
20
|
0.06
|
0.25
|
乳房链球菌
|
17
|
0.06
|
0.25
|
停乳链球菌
|
22
|
0.06
|
0.25
|
大肠杆菌
|
21
|
0.06
|
0.50
|
化脓棒状杆菌
|
14
|
0.06
|
0.60
|
沙门氏菌
|
18
|
0.06
|
0.25
|
肺炎球菌
|
20
|
0.06
|
0.35
|
布氏杆菌
|
15
|
0.06
|
0.80
|
结核分枝杆菌
|
17
|
0.06
|
0.45
|
魏氏梭菌
|
22
|
0.06
|
0.25
|
肉毒梭菌
|
20
|
0.08
|
0.35
|
水肿梭菌
|
18
|
0.06
|
0.25
|
破伤风梭菌
|
12
|
0.10
|
1.05
|
气肿疽梭菌
|
15
|
0.09
|
1.20
|
多杀性巴氏杆菌
|
24
|
0.06
|
0.25
|
鼻疽杆菌
|
16
|
0.06
|
0.50
|
螺旋杆菌
|
17
|
0.06
|
0.45
|
注：MIC50表示50%的细菌被杀死的最小浓度，MIC90表示90%的细菌被杀死的最小浓度。
易泰溶菌酶对兽医临床中常见的三种有益菌（乳酸杆菌、双歧杆菌、蜡状芽孢杆菌）以48μg/ml浓度抑菌，没有影响。
六、易泰溶菌酶抗菌机理
细菌细胞壁由胞壁质组成，胞壁质是由 N-乙酰氨基葡糖
(NAG)和N-乙酰胞壁酸(NAM)交替组成的多聚物，胞壁酸残基上可以连接多肽，称为肽聚糖(Peptidoglycan)。肽聚糖是细菌细胞壁的主要成分，它是由NAM、NAG和肽“尾”(一般是4个氨基酸
)组成，NAM与NAG通过β-l,4糖苷键相连，肽“尾”则是通过D-乳酰羧基连在NAM的第3位碳原子上，肽尾之间通过肽“桥
”(肽键或少数几个氨基酸
)连接，NAM、NAG、肽“尾”与肽“桥”共同组成了肽聚糖的多层网状结构，作为细胞壁的骨架，上述结构中的任何化学键断裂，皆能导致细菌细胞壁的损伤。1959～1963年通过大量研究，Salton等人证明溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖，其水解位点是N-乙酰胞壁酸(NAM)的l位碳原子和N-乙酰氨基葡糖(NAG)的4位碳原子间的β-l，4糖苷键，结果使细菌细胞壁变得松弛，失去对细胞的保护作用，最后细胞溶解死亡。G+细菌细胞壁几乎全部由肽聚糖组成，没有由脂多糖、磷脂、糖脂组成的外膜覆盖，而G-细菌有外膜保护并且只有内壁层为肽聚糖，因此，溶菌酶对于G+细菌效果突出，而对G-细菌作用稍差。
1965年，David
Phillips和他的牛津同事等根据晶体学研究提出的底物结合方式和溶菌酶的催化作用机制，曾在各种化学实验中得到验证，生物催化作用使得溶菌酶的作用更具特色。
七、易泰溶菌酶临床效果比实验室效果好
溶菌酶是生物体内重要的非特异性免疫因子，具有抗菌、抗病毒、增强免疫力和促进创伤组织修复等多重功能。从溶菌酶实际应用效果来看，往往要比实验室抑菌效果好很多。其主要原因是：溶菌酶具有良好的生物相容性，不但直接水解致病细菌细胞壁，而且和动物体内的其他多元生物物质联合作用，抑杀细菌，中和毒素，增强体质，促进生长；其次，动物机体内环境恰好满足溶菌酶的最佳作用条件。而在实验室里，还不具备理想的体现溶菌酶动物体内作用的模拟实验。
八、溶菌酶与抗生素配伍的增效作用：
联合应用的目的：
延迟或减少耐药菌的出现；
扩大抗菌谱;
减少药物的副作用;
溶菌酶与抗生素配伍，增效效果与有害细菌的细胞壁的肽聚糖含量有直接关系，一般与抗生素联合使用能使药效增加到原料的30%左右。
因此，溶菌酶可以提高抗生素治疗效果，消除抗生素免疫抑制！
九、动物药业使用方法推荐
易泰溶菌酶（原粉，兽药级）：酶活单位500万u/g（每1g原粉可以拌料100kg，饮水150kg）。
应用思路举例：
1.新品上市，配伍使用：提高免疫，增效主药，加快康复，促进生产。一般地，西药粉剂中1～1.5%添加量，中药散剂中0.2～0.5%添加量。根据组方调整用量。
2.产品升级，微调配方：使用溶菌酶代替作用不确切或者耐药性突出的抗生素组分和增效剂，几乎不增加配方成本，缓解耐药性，体现差异化。
3.高端动保，绿色安全：精心设计绿色动保产品和功能性添加剂，为动物安全和食品安全保驾护航。例如，按照饲料添加剂的运作模式，推出新型抗菌抗病毒的绿色动保产品(以50万u/g制剂计，推荐使用量：全价料中，家畜100～150g/t，家禽80～100g/t)。
4.特色分装，多效递增：配合解热镇痛，保肝利胆，特色组合，以兽药增效和免疫增强为突破，争取经销热情，推动市场创新。
十、饲料企业和养殖企业使用方法推荐
易泰溶菌酶（原粉，饲料级）：酶活单位500万u/g，畜禽料每吨全价料添加15～20g，水产料中每吨全价料中添加20～30g。
溶菌酶制剂：50万u/g，畜禽料每吨全价料添加100～200g，水产料中每吨全价料中添加200～400g。
例如，正本清源，在母猪料中添加溶菌酶，能够显著改善母猪的繁殖性能，增强母猪免疫力，提高抗病力，扩大生产力；尤其是新生仔猪表现出更好的生长优势。
不含抗生素，所以更安全；增效抗生素，所以效果好！
澳大利亚易泰集团（中国）投资有限公司
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