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平皿计数法测定生活饮用水的菌落总数

2011-10-30 14:15阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/1677257873

实验八 平皿计数法测定生活饮用水的菌落总数

一、实验目的 平皿计数法测定生活饮用水的菌落总数1.学会使用高压蒸汽灭菌器。
2.掌握营养琼脂的配制方法。
3.测定生活饮用水的菌落总数。

二、实验原理
平皿计数法测定生活饮用水的菌落总数水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数即为菌落总数。

三、主要试剂和仪器
1.营养琼脂：取营养琼脂33.0g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，分装三角瓶，121℃高压灭菌
ont FACE='Arial'>15分钟，备用高压蒸汽灭菌器。
2.培养箱36℃±1℃。
3.电炉。
4.冰箱。
5.放大镜或菌落计数器。
6.灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等。

四、检验步骤
1.饮用水
以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
待冷却凝固后，翻转平皿，使地面向上，置于36℃±1℃培养箱内培养48h,进行菌落计数，即为水样1mL中的菌落总数。
2.水源水
以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:10稀释液。
吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀释液。按同法一次稀释成1:1000,1:10000稀释液等备用。如此递增稀释液一次，必须更换一支1mL灭菌吸管。
用灭菌吸管取未稀释的水样和2个~3个适宜稀释度的水样，分别注入灭菌平皿内，一下操作同生活饮用水的检验步骤。

五、数据记录与处理
饮用水菌落总数检验原始记录
任务名称
 桂林市自来水公司日分析
 检测项目
 总大肠菌群
检验依据
 GB/T 5750.12-2006
 分析方法
 平皿计数法
仪器名称
 培养箱
 仪器编号
 SB102
营养琼脂编号
 /
 /
 /
检验地点
 万级无菌室
样品数据
样品编号
 样品量v
(ml)
 平行样1结果（CFU/mL）
 平行样2结果（CFU/mL）
 报告值
（CFU/mL）
 是否合格
空白
 /
 0
 /
 0
 /
D20110830N01
 1.0
 1
 0
 0
 合格
D20110830N02
 1.0
 0
 0
 0
 合格
D20110830N03
 1.0
 0
 0
 0
 合格
D20110830N04
 1.0
 0
 0
 0
 合格
D20110830N05
 1.0
 0
 0
 0
 合格
D20110830N06
 1.0
 0
 0
 0
 合格
D20110830N07
 1.0
 0
 0
 0
 合格
D20110830N08
 1.0
 0
 0
 0
 合格
D20110830N09
 1.0
 0
 0
 0
 合格
D20110830N10
 1.0
 0
 0
 0
 合格
D20110830W35
 1.0
 188
 154
 240
 不合格
D20110830W35
 0.1
 27
 35

N:内样
W：外样
内控指标：直饮水：≤50
出厂水：≤50
管网水：≤100

不同稀释度的选择及报告方法：
1.首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此选择范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2.若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2，应报告两者的平均数。若大于等于2则报告其中稀释度较小的菌落总数。
3.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
6.若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。
本次试验选择了两个稀释度，其生长的菌落数在30~300之间所以按一下方法计算：



稀释度选择及菌落总数报告方式

 不同稀释度的平均菌落数
 两个稀释度菌落数之比
 菌落总数/（CFU/mL）
 报告方式/（CFU/mL）
100
 10-1
 —
 —
1
 171
 31
 1.8
 240
 240

六、讨论
1.选择不同的稀释度，根据结果的不同报告方式也有所不同，必须严格按照规定来计算。
2.作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又恨均匀，则可将此半皿计数后乘以2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。

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