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核酸电泳相关试剂、缓冲液配方（一）

2010-08-11 15:13阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/1780530357

1、50X TAE Buffer （pH8.5）
组分浓度：2M Tris－醋酸，100mM EDTA
配制量：1L
配制方法：
（1）称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tris 242.2g；Na2EDTA•2H2O 37.2g。
（2）加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解，再加入57.1ml的醋酸，充分搅匀。
（3
）加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。


2、10X TBE Buffer （pH8.3）
组分浓度：890mM Tris－醋酸，20mM EDTA
配制量：1L
配制方法：
（1）称取下列试剂，置于1L烧杯中。Tris 108g；Na2EDTA·2H2O 7.44g；硼酸 55g。
（2）加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
（3）加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。


3、10X MOPS Buffer
组分浓度：200mM MOPS，20mM NaAc，10mM EDTA
配制量：1L
配制方法：
（1）称取41.8g MOPS，置于1L烧杯中，加入约800mlDEPC处理水，搅拌溶解。
（2）用1M NaOH调节pH至7.0。
（3）再加入一下试剂 1M NaAc（DEPC处理） 20ml；0.5M EDTA（pH8.0）（DEPC处理） 20ml
（4）用DEPC处理水将溶液定容至1L。
（5）用0.45μm滤膜过滤除杂，室温避光保存。
注意：溶液见光或高温灭菌后会变黄，仍可以使用，但变黑则不能使用


4、溴化乙锭（10mg/ml）
组分浓度：10mg/ml 溴化乙锭
配制量：100ml
配制方法：
（1）称取1.0g溴化乙锭，加入到200ml容器中。
（2）加入去离子水100ml，充分搅拌数小时完全溶解溴化乙锭。
（3）将溶液转入棕色瓶，室温避光保存。
（4）溴化乙锭最终工作浓度为0.5μg/ml。


5、6X DNA Loading Buffer（单染料）
组分浓度：0.25％（W/M）溴酚蓝，30％（W/M）甘油
配制量：10ml
配制方法:
（1）称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中。溴酚兰 25mg。
（2）向离心管中6ml去离子水，充分搅拌溶解。
（3）加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml，室温保存。


6、6X DNA Loading Buffer（双染料）
组分浓度:0.25％（m/M）溴酚蓝，0.25％（m/M）二甲苯腈蓝FF，30％（m/M）甘油
配制量 10ml
配制方法：
（1）称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中：溴酚兰 25mg；二甲苯腈蓝FF 25mg
（2）向离心管中6ml去离子水，充分搅拌溶解。
（3）加入3ml甘油混匀，最终用去离子水定容至10ml，室温保存。


7、10X RNA Loading Buffer（单染料）
组分浓度：10mM EDTA，0.25％（m/M）溴酚蓝，50％（m/M）甘油
配制量：10ml
配制方法：
（1）称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中：0.5M EDTA（pH 8.0） 200μl；溴酚兰 25mg
（2）向离心管中4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。
（3）加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温保存。


8、10X RNA Loading Buffer（单染料）
组分浓度：10mM EDTA ，0.25％（W/V）溴酚蓝，0.25％（W/V）二甲苯腈蓝FF，50％（V/V）甘油
配制量：10ml
配制方法：
（1）称取下列试剂，置于15ml塑料离心管中。
0.5M EDTA（pH 8.0） 200μl；溴酚兰 25mg；二甲苯腈蓝FF 25mg
（2）向离心管中4mlDEPC处理水，充分搅拌溶解。
（3）加入5ml甘油混匀，用DEPC处理水定容至10ml，室温保存。

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