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- MTT试验是检测细胞相对数量的快捷方法，操作得当实验结果很有参考价值。但如果对于这些细节问题没有加以注意也可能造成检测结果毫无意义。
一般情况下，96孔培养板的一孔内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后大小差异悬殊，因此，在进行MTT试验前，有必要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止时细胞不过满。这样，才能保证MTT结晶形成量与细胞数呈线性关系。如果细胞数过多则敏感性降低，而太少则观察不到差异。
2、药物浓度的设定
设定加药浓度前一定要多看文献，参考别人的结果先确定一个比较大的范围初筛，再根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围细筛。切不可凭空想象个浓度区间，这样很可能你用浓度根本不是药物的有效浓度。如果没有相关方面的文献报道，初筛时一定要保证浓度范围足够大，并逐渐缩小范围，找到最适浓度区间。
3、时间点的设定
在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。
4、培养时间
200μl的培养液对于104～105个增殖期细胞来说，很难维持48h以上，而营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而静止，对实验结果影响很大，建议实验超过48h以上的，在培养48h时进行换液。［对于某些需要长时间作用且易降解的药物，应在培养24h时以含相应的药物浓度培养液进行换液处理］
5、试验敏感性