生物化学实验指导 实验2 琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性
2010-09-13 22:19阅读：
（一）原 理
琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中的一个重要的酶，测定细胞中有无这种酶可以初步鉴定三羧酸循环途径是否存在。琥珀酸脱氢酶可使其底物脱氢，产生的氢可通过一系列传递体最后递给氧而生成水。在缺氧的情况下，若有适当的受氢体也可显示出脱氢酶的作用。如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。
琥珀酸 +
甲烯蓝 琥珀酸脱氢酶
延胡索酸 + 甲烯白
无氧条件
丙二酸的化学结构与琥珀酸相似，它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合，则不能再催化琥珀酸脱氢，这种现象称为竞争性抑制。如相对地增加琥珀酸的浓度，则可减轻丙二酸的抑制作用。
（二）试
剂
1．1.5%琥珀酸钠溶液：称取琥珀酸钠1.5g，用蒸馏水溶解并稀释至100ml。如无琥珀酸钠可用琥珀酸配成水溶液后，以氢氧化钠溶液中和至pH7~8。
2．1%丙二酸钠溶液：称取丙二酸钠1g，用蒸馏水溶解并稀释至100ml。
3．0.02%甲烯蓝溶液。
4．1/15mol/LNa2HPO4溶液：取Na2HPO4
·
2H2O 11.8g，用蒸馏水溶解并稀释至1
000ml。
5．液体石蜡。
（三）操
作
1．猪心脏制备液：称取新鲜猪心1.5~2.0g放组织捣碎机中，加入等体积的石英砂及1/15mol/LNa2HPO4溶液3~4ml，捣碎成浆，再加入6~7ml1/15mol/LNa2HPO4溶液，放置1小时，不时摇动，离心取上清液备用。
2．取4支试管，编号并按下表操作：
试管 心脏制备液
1.5%琥珀酸钠溶液 1%丙二酸钠溶液
蒸馏水 0.02%甲烯蓝溶液
（滴）
（滴）
（滴）
（滴）
（滴）
|
1
5
5
－
10
2
2
5
5
－
10
2
（先煮沸）
3
5
5
5
5
2
4
5
10
5
5
2
|
3．各管溶液混匀后，每管各加液体石蜡一薄层（约5~10滴）。为什么？
4．各管置于37℃水浴中，半小时内观察各管颜色变化，比较其速度并说明原因。然后将第1管用力摇动，观察其有何变化？为什么？
