小鼠抗新冠病毒S蛋白IgG亚型抗体ELISA检测试剂盒
2022-07-27 10:52阅读：
小鼠抗新冠病毒S蛋白IgG亚型抗体ELISA检测试剂盒
【间接法酶联免疫法定量】
产品货号：EKnCov-S1Ab-03b
（实验前请仔细阅读产品说明书）
声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!本试剂盒不含任何具有生物危害成分，但是试剂盒使用涉及的检测样本请在具有相应生物安全防护实验室进行，由此可能造成的所有生物安全危害由使用者自行负责。
本产品适用于体外定量检测小鼠血清、血浆或其它相关生物液体中鼠源抗新冠病毒(奥密克戎)RBD蛋白IgG抗体。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系我们。
试剂盒组成：
组分名称
规格
保存条件
数量
ELISA酶标板(包被S蛋白抗原)
96T
-20
1
标准品(小鼠抗S蛋白
IgG抗体)干粉
干粉
-20
2
浓缩HRP羊抗小鼠IgG（100×）
120ul
-20
1
通用稀释液
30ml
4
1
浓缩洗涤液（25×）
30ml
4
1
TMB底物液
12ml
4
1
反应终止液
12ml
4
1
酶标板覆膜
5
产品说明书
1
特别说明：
1.打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整。
2.一周内使用可存于4，需长时间保存或多次使用请按保存条件存放。
检测原理:本试剂盒采用经活性验证的新冠病毒S蛋白抗原作为包被物，检测时待检血清或标准品（抗新冠病毒S蛋白IgG型抗体）与包被物结合，游离成分被洗去，加入HRP羊抗小鼠IgG，最后加入单组份TMB底物液。
如果待检样品中含有针对新冠S蛋白的IgG亚型抗体，TMB底物液在HRP催化下显色，加入终止液终止显色后，在酶标仪OD450/OD630读取吸光值，吸光值大小与待检测IgG浓度呈正相关，根据标准品浓度/吸光值绘制的标准曲线，可计算出待检样品中抗新冠病毒S蛋白IgG型抗体含量。
样品收集:
1.血清：全血样品于室温放置2小时或4过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。
3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M,
pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5.其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
6.样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7.样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20(1个月内检测)，或-80（6个月内检测），避免反复冻融。
8.如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。
试验所需自备物品:
1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL,
200-1000μL
3.37恒温箱，双蒸水或去离子水
4.吸水纸
检测前准备工作:
1.请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。
2.洗涤液配制：将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50，使用时洗涤液应为室温）。当日使用
。
3.标准品配制:
向干粉标准品中加入500uL
ddH2O,此时标准品浓度为20ng/mL。然后根据需要用通用稀释液
进行1：2倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）,
建议配制成以下浓度：20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0ng/mL，通用稀释液直接作为空白孔0ng/mL。
4.
HRP羊抗小鼠IgG工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），用通用稀释液稀释实际配制时应多配制100-200μL。
洗涤方法:
1.自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。
2.手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。
操作步骤:
实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。
1.加样：分别设空白孔、标准品孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μL，标准品孔别加依次梯度稀释标准品，待测样品孔加待测样品
100μL，给酶标板覆膜，37孵育 60分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL
/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
立即每孔加入配好的HRP羊抗小鼠IgG工作液100μL（在使用前15
分钟内配制），注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37孵育
60分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新配制的二抗。
4. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL
/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。每孔加TMB底物溶液100μL，酶标板加上覆膜 37避光孵育
15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。
5.每孔加终止液
100μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
6.立即用酶标仪在 450nm
波长测量各孔的光密度（OD值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。
7.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。
