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细胞凝集反应实验报告

2011-04-29 10:57阅读：

http://blog.sina.cn/dpool/blog/u/1841975983

细胞凝集反应实验报告
【摘要】细胞凝集素可以将不同的细胞粘连在一起，在显微镜下可以观察到最终形成大的细胞团块，可以观察到细胞的凝集现象。通过不同的变量，控制细胞凝集反应因素，观察细胞凝集程度。
【关键字】血细胞 凝集素 凝集反应
【背景介绍】
细胞凝集指细胞与细胞之间通过某种凝集素的作用而相互粘连在一起的现象，最终形成大的细胞团块，在不用显微镜时即可用肉眼看到的明显的现象。早在1896年，Widal就利用伤寒患者的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。至1900年，Landsteriner在特异性血凝现象的基础上发现了人类血型，并于1930年获得了诺贝尔奖。凝集实验灵敏度高，方法简便，迄今已成为通用的免疫学实验技术，广泛应用于临床检验。
凝集素是一种能够与糖类物质特异性结合的糖蛋白，具有一个以上同糖结合的位点，因此能够参与细胞识别和粘连，从而将不同的细胞联系起来。常见的凝集素有刀豆素A
、麦胚素、花生凝集素、大豆凝集素等。凝集素主要的作用就是凝集细胞和刺激细胞分裂，在细胞间形成“桥”的作用，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
细胞的凝集与细胞的细胞膜有关，细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被，目前普遍认为，细胞间的联系，以及细胞的生长分化，免疫反应等都与细胞表面的糖蛋白有关。
细胞凝集的作用很多，机体免疫中反应中，细菌等颗粒性病原体会与凝集素结合而产生凝集反应，从而被更好的清除。
细胞凝集在实际中应用广泛，在临床上血细胞的凝集作用可用于血型鉴定，同时凝集素可以作为饲料添加剂，帮助抵御感染。
【实验材料】
1、 试剂：土豆凝集素（已制备好）、2% 兔血红细胞悬液、PBS缓冲液、生理盐水。
2、 仪器：移液管、离心管、离心机、有凹坑的载玻片、带刻度的试管若干、显微镜。
【实验方法】
1、检查实验所用的仪器是否完备，完好，准备实验；
2、土豆切片，取2g放入10ml的PBS缓冲液中浸泡2h，获取土豆凝集素（此步骤已有老师准备好）；
3、梯度稀释制备不同浓度的土豆悬浮液：取1ml的土豆凝集素悬浮液原液于其中一只试管中，并编号1×；另取0.5ml的土豆悬浮液原液于另一只试管中，加入0.5ml的PBS缓冲液，并编号0.5×；再去一只试管，加入1ml的PBS缓冲液，并编号0×；
4、取1ml已制备好的2%的兔血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管中加入0.5ml生理盐水，混合均匀并编号1%；在1%的试管中取0.5ml的细胞悬液于另一只试管中，并加入0.5ml的生理盐水，混合均匀编号0.5%；（在实验时由于各方面原因，误将已制备好的2%兔细胞悬液当做兔的静脉血，而加入3ml的生理盐水，进行离心分离，从而重复实验不必要的步骤，需要在以后实验时多注意老师讲解，准备好再进行实验，以免浪费时间）
5、按如下表所示，用移液管取一滴凝集素或PBS液于载玻片凹坑内，再加一滴血细胞悬液，旋转混合摇匀，在加入血细胞悬液后即开始计时，观察细胞凝集需要多长时间，并平行三次，记录所需时间。实验时在载玻片的另一个凹坑内进行阴性对照，是实验结果更明显，更准确。10min在显微镜下观察细胞凝集现象，并做好记录；
表一 细胞凝集试验有关数据记录
Lectin
RBC
 1×
 0.5×
 0×
细胞凝集反应实验报告2%
 A-1(110s-103s)
 A-2(270s-173s)
 A-3(--)

100s
 90s
 120s
 150s
 200s
 170s
 -
 -
 -
1%
 B-1(170s-122s)
 B-2(335s-230s)
 B-3(--)

120s
 136s
 110s
 281s
 220s
 190s
 -
 -
 -
0.5%
 C-1(180s-163s)
 C-2(360s-247s)
 C-3(--)

210s
 190s
 90s
 350s
 210s
 180s
 -
 -
 -

（备注：A-1（110s-103s）中，110s表示标准时间，103s表示实验时测得的时间。）
以下为相应的图表：
细胞凝集反应实验报告
细胞凝集反应实验报告
【实验结果】
由以上的数据以及图表可知，细胞凝集的时间比较快的，几分钟就可以凝集，同时细胞凝集的时间也与土豆凝集素的浓度，以及血细胞的浓度有关，凝集素的浓度越高，血细胞的浓度越高，细胞凝集的时间越短，凝集现象也越明显：以下的图片即为10min后细胞凝集的现象：(由于在肉眼下的实验照片比较模糊，效果不是很好)
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以下是在显微镜下观察到的细胞凝集现象：
细胞凝集反应实验报告 细胞凝集反应实验报告
A-1(4倍下图片) A-2（4倍下图片）
细胞凝集反应实验报告 细胞凝集反应实验报告
B-1（4倍下图片） B-24倍下图片()
细胞凝集反应实验报告 细胞凝集反应实验报告
C-1(4倍下图片) C-2(4倍下图片)
细胞凝集反应实验报告
（空白对照）
以上便是整个实验结果；
【实验讨论】
1、 在上述实验中，通过对细胞凝集的时间对比记录，可以看出，在同一组的平行实验中，细胞凝集的时间差别很大，可能的原因有：时间记录起点不同；或者在获取细胞悬液以及凝集素时，因为吸管中残留液体，使得样品混合，不能得到准确结果；或者最后细胞凝集的结果，看到细胞凝集现象时的终点不易掌握，记录时间存在一定差距；
2、 实验过程中出现的失误造成实验延误，比如实验开始时增加细胞沉淀取得步骤，在记录细胞凝集时间时，出现时间上的失误；
3、 由实验结果可以明显观察到，影响细胞凝集的因素有凝集素的浓度，以及血细胞浓度，在一定浓度范围内，影响细胞凝集的时间以及程度；
4、 在相应的图表上，可以明显看到：在一定细胞悬液浓度下，不同细胞凝集素对细胞凝集时间以及细胞凝集的程度的影响；还有在一定细胞凝集素浓度时，不同细胞浓度对实验结果的影响；
5、 同时从空白对照还可以看出，细胞发生凝集时凝集素必不可少的，没有细胞凝集素，细胞几乎不发生凝集。
【参考文献】
1、杨汉民 细胞生物学实验 ［M］高等教育出版社，1997.8；
2、《分子细胞生物学》第三版 韩贻仁主编 高等教育出版社；


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