1.5 重组质粒pET28a(价格750元)-BmTnCⅢ的构建与鉴定将表达载体 pET-28a与扩增得到的
BmTnCⅢ基因片段均用限制性内切酶 BamHⅠ和 HindⅢ酶切后连 接 ，
转化大肠杆菌TG1得到重组质粒pET-28a-BmTnCⅢ。提取重组质粒，进行 PCR
鉴定，结果有与预期大小一致的条带，阴性对照无条带；重组质粒用 BamHⅠ和 HindⅢ进行双酶切并电泳，结果在 462 和 5 000
bp 附近出现两个条带，证实重组成功(图 5)。 将重组质粒进行 DNA测序分析，结果发现克隆得到的
BmTnCⅢ基因序列完全正确(图略)。
1.6 pET-28a-BmTnCⅢ的诱导表达及纯化
经终浓度为 1 mmol/L 的IPTG诱导的pet28a重组菌，超声裂解后的电泳结果显示，表达的融合蛋白既存在于上清中，也存在于沉淀中，而上清中的含量较高，即该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达(图6)。将诱导的重组菌利用超声波进行破碎，再将获得的上清用于亲和纯化。纯化后所得到的目的蛋白经载体构建获得 10
1.6 pET-28a-BmTnCⅢ的诱导表达及纯化
经终浓度为 1 mmol/L 的IPTG诱导的pet28a重组菌，超声裂解后的电泳结果显示，表达的融合蛋白既存在于上清中，也存在于沉淀中，而上清中的含量较高，即该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达(图6)。将诱导的重组菌利用超声波进行破碎，再将获得的上清用于亲和纯化。纯化后所得到的目的蛋白经载体构建获得 10