鲜鸡蛋黄中沙门氏菌的致死温度及时间的探索
2012-08-12 08:46阅读:
摘要:
本文对鲜鸡蛋中的沙门氏菌进行前增菌、增菌及生化鉴定,从鲜鸡蛋黄中分离得到沙门氏菌,然后对得到的沙门氏菌在不同温度下加热,得到相应的致死时间。
关键字:鲜鸡蛋;沙门氏菌;生化鉴定;单一变量
沙门氏菌(Salmonella)是肠杆菌科中重要的常见人畜共患病原菌。该菌广泛分布于自然界,目前全世界已经发现2 523
个血清型,我国发现的血清型近300
个。许多血清型的沙门氏菌都能产生毒素,以肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌最为常见[1]。常见的肉类食品和奶蛋类食品都会被沙门氏菌污染,在世界各地的食物中毒中,沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第2
位
[2]。有资料显示,我国细菌性食物中毒中70%~80%是由沙门氏菌引起的[4]。另外,每年出口的食品由于沙门氏菌污染而造成退货或索赔,以及食品加工厂由于沙门氏菌污染,经常导致重大的经济损失。因此,对食品中致病菌的监测和检验也就越显示其重要性[3]。
鸡蛋中含有多种丰富的营养成分,非常适宜于沙门氏菌的生长繁殖。沙门氏菌是一种常见的重要人畜共患病原菌,它不仅能导致鸡白痢、鸡伤寒、副伤寒、仔猪副伤寒、流产等动物疾病,还能引起人类的沙门氏菌病如胃肠炎、食物中毒、腹泻、败血症等[6]。鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏是家禽生产中对蛋鸡具有高发病率和死亡率的两种病原体,
但它们却极少引起人类发病。相反,鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌是家禽常携带的两种病原体,
它们很少或根本不会引发鸡的临床症状,
但却很容易引发人类的感染。这两种沙门氏菌能够持续存在于蛋鸡卵巢和输卵管中,
直接污染蛋鸡(垂直传播)。但最常见的污染方式还是来自于污染环境的水平传播。因此对鸡蛋进行沙门氏菌检测对于公共卫生检疫、养鸡场的卫生监管、消费者的身心健康均具有重要的意义[5]。
本文对鲜鸡蛋中的沙门氏菌进行检测,并摸索出了沙门氏菌的致死温度及时间,为人们安全食用鲜鸡蛋具有指导意义。
1 材料与方法
1.1
材料
1.1.1 样品鲜鸡蛋
2012年4月19日从山东省潍坊市奎文区世纪泰华福乐多早春园店内随机购买鲜鸡蛋9枚,装袋带回试验室,置于4℃冰箱内进行保存。
1.1.2 培养基
缓冲蛋白胨水(PBW);四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB);亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC);亚硫酸铋琼脂(BS);木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂;三糖铁琼脂(TSI);赖氨酸脱羧酶(LIA)培养基;尿素琼脂;蛋白胨水;PBW琼脂培养基。
1.1.3 仪器设备
冰箱;天平;恒温培养箱;全自动高压灭菌器;超过滤净化工作台;过滤灭菌器;试管;培养皿;三角瓶;试管;移液管等试验室常用仪器器材。
1.2
方法
1.2.1 前增菌
用自来水将鲜鸡蛋清洗干净,然后在超净工作台下用无菌纱布蘸75%的酒精擦洗蛋壳表面;接着将鸡蛋轻轻碰击台面磕开1cm左右直径的裂痕,用无菌镊子去掉破碎的蛋壳,随后轻轻撕破卵壳膜,将卵白全部引出流入烧杯中,再用无菌镊子将卵黄膜刺破引卵黄进入另一烧杯,混合9个鸡蛋的卵黄;用10mL无菌移液管分别移取10mL置于装有9个190mL缓冲蛋白胨水(BPW)的250mL无菌锥形瓶中。在9个锥形瓶瓶壁上分别标记代码1、2…9,最后将菌液置于36±1℃的恒温培养箱上培养,24h后进行增菌。
1.2.2 增菌
用无菌移液管从9个前增菌液中分别吸取10mL,分别转接于装有100mL四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液或100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)的培养瓶中,每种增菌液做三个重复;随后在菌液壁上标记(TTB增菌标记1-1、1-2、1-3、2-1……9-3;SC增菌标记1-4、1-5、1-6、2-4……9-6);最后将两种培养基分别置于不同恒温培养箱内42℃(TTB)及36±1℃(SC),培养18~24h。
1.2.3选择性培养
用无菌接种环在无菌环境下蘸取少许增菌液,划线接种于亚硫酸铋琼脂平板(BS)和木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂平板上,标记后置于培养箱中于36±1℃培养40~48h(BS琼脂平板)及18~24h(XLD琼脂平板)。定时观察菌体在平板上的长势。
1.2.4 纯培养
挑选分离培养基上的可疑沙门氏菌单菌落,用无菌接种环挑取少许菌落移接到PBW琼脂培养基斜面中进行纯培养,标记后置于中36℃培养箱培养;24h后置于4℃冰箱内保存。
1.3
生化鉴定
将分离出的菌种分别接种于三糖铁培养基(穿刺)、尿素酶培养基(穿刺)、蛋白胨水(供作靛基质试验)、赖氨酸脱羧酶(LIA)试验培养基内,置于恒温培养箱中36±1