一、CCK8检测细胞增殖/毒性的原理
Cell
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一、CCK8检测细胞增殖/毒性的原理
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-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy
用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
CCK8的优点：
使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；
CCK-8法能快速检测；
CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；
CCK-8法的重复性优于MTT
CCK-8法对细胞毒性小；
CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
CCK8的缺点：
与MTT法相
CCK8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。
与以往的增殖/毒性测定试剂相比较：
二、CCK8检测细胞增殖/毒性的方法
实验一：细胞增殖分析
1、制备细胞悬液：细胞计数
2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入10ul
5、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
6、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。
实验二：细胞毒性分析
1、制备细胞悬液：细胞计数
2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入不同浓度的毒性物质
5、37℃培养箱中培养：加入毒性物质的培养时间，要看毒性物质的性质和细胞的敏感性，一般要根据细胞周期来决定，起码要一代以上的时间。
6、加入10ul
7、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
8、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。
注：
若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10
如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
三、CCK8检测细胞增殖/毒性的注意事项
当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000
酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。
CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。
当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450
金属对CCK-8显色有影响：当终浓度为1
悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。
转载：（乐研生物
推荐产品：
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北京华夏远洋科技有限公司
产品订购及咨询
手机：15300268118
Q Q：903900912
邮箱：skypple@163.com
地址：北京市海淀区西北旺甲2号院
华夏远洋生物商城：http://www.hxbio.net/
用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
CCK8的优点：
使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；
CCK-8法能快速检测；
CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；
CCK-8法的重复性优于MTT
CCK-8法对细胞毒性小；
CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
CCK8的缺点：
与MTT法相
CCK8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。
与以往的增殖/毒性测定试剂相比较：
| 检测方法 |
MTT法 |
XTT法 |
WST-1法 |
CCK8法 |
| 甲臢产物的水溶性 |
差（需加有机溶剂溶解） |
好 |
好 |
好 |
| 产品性状 |
粉末 |
2瓶溶液 |
溶液 |
1瓶溶液 |
| 使用方法 |
配成溶液后使用 |
现配现用 |
即开即用 |
即开即用 |
| 检测灵敏度 |
高 |
很高 |
很高 |
高 |
| 检测时间 |
较长 |
较短 |
较短 |
最短 |
| 检测波长 |
560-600nm |
420-480nm |
420-480nm |
430-490nm |
| 细胞毒性 |
高，细胞形态完全消失 |
很低，细胞形态不变 |
很低，细胞形态不变 |
很低，细胞形态不变 |
| 试剂稳定性 |
一般 |
较差 |
一般 |
很好 |
| 批量样品检测 |
可以 |
非常适合 |
非常适合 |
非常适合 |
| 便捷程度 |
一般 |
便捷 |
便捷 |
非常便捷 |
二、CCK8检测细胞增殖/毒性的方法
实验一：细胞增殖分析
1、制备细胞悬液：细胞计数
2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入10ul
5、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
6、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。
实验二：细胞毒性分析
1、制备细胞悬液：细胞计数
2、接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。
3、37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。
4、加入不同浓度的毒性物质
5、37℃培养箱中培养：加入毒性物质的培养时间，要看毒性物质的性质和细胞的敏感性，一般要根据细胞周期来决定，起码要一代以上的时间。
6、加入10ul
7、培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。
8、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。
注：
若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10
如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
三、CCK8检测细胞增殖/毒性的注意事项
当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000
酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。
CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。
当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450
金属对CCK-8显色有影响：当终浓度为1
悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。
转载：（乐研生物
推荐产品：
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| 产品编号 | 产品名称 | 产品包装 | 产品价格 |
| C0038 | Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒) | 500次 | 612.00元 |
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