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医学微生物实验报告

2013-04-18 22:19阅读:
医学微生物实验报告
2013 4
一.实验题目 球菌的鉴定
医学微生物实验报告

二.实验原理
1.胆汁七叶苷:有的细菌可耐受胆汁并可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素,七叶素与培养基中枸橼酸铁的二价铁离子反应,生成黑色的化合物,使培养基呈黑色。
主要用于D
群链球菌与其它链球菌的鉴别,前者阳性,后者阴性。也可用于革兰阴性杆菌及厌氧菌的鉴别。
2.触酶实验:具有过氧化氢酶的细菌能催化过氧化氢生成水和新生态氧,继而形成分子氧出现气泡。常用于革兰阳性球菌初步分类葡萄球菌属和微球菌属为(+);链球菌属为(-
3.血浆凝固酶实验病原性葡萄球菌能产生血浆凝固酶,使血浆中纤维蛋白原变为不溶性纤维蛋白,附于细菌表面,生成凝块,因而具有抗吞噬的作用。若在血浆侧迅速(2min)出现凝集颗粒,而盐水对照侧未出现凝集者则为阳性。判定该菌株是否具有致病力。葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金黄色葡萄球菌与其他葡萄球菌。
4.CAMP实验: B群链球菌能产生CAMP因子,促进葡萄球菌的溶血素溶解红细胞的能力,故在交界处溶血增强,出现箭头形透明溶血区。鉴定B群链球菌
5.杆菌肽敏感试验:A群链球菌对杆菌肽几乎是100%敏感,而其它群链球菌对杆菌肽通常耐药。故此试验可对链球菌进行鉴别。抑菌圈直径大于10mm为敏感,
小于10mm为耐药。应用:主要用于A群链球菌与非A群链球菌的鉴别。
6.奥普托辛敏感试验:几乎所有的肺炎链球菌都对奥普托欣敏感,而奥普托欣对于其他链球菌则无抑制作用。5μg/片含量,抑菌环>18mm为敏感, <15mm为不敏感,1518mm应重复实验。应用:鉴定肺炎链球菌

三.实验器材
八个菌种酒精灯 接种环 玻片 革兰染液 打火机 生理盐水75%酒精 石蜡精油 蒸馏水 血平板培养基 普通琼脂平板培养基 药敏纸片 微量管 酒精灯 接种环 玻片 革兰染液 打火机 生理盐水75%酒精 石蜡油 蒸馏水









四、检验程序
粪便、尿、脓、痰等 血液、穿刺液等
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(血平板)
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初步鉴定:触酶实验
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最终鉴定
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血清学鉴定 全套生化反应
医学微生物实验报告血清凝集实验
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五.实验步骤
1.将菌种接种于血平板上,分离接种得到单个菌落
2.单个菌落肉眼观察和描述
医学微生物实验报告菌落描述:
1号菌:完全溶血,单个菌落呈乳黄色,大小1—2mm表面光滑湿润圆形突起,边缘整齐。
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2号菌:无溶血,柠檬黄色,大小1-1.5mm表面光滑湿润,圆形突起,边缘整齐。
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3号菌:无溶血,灰白色,大小-1.5mm 粘液型,表面光滑湿润边缘整齐。
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4号菌:无溶血,白色,大小1-1.5mm表面光滑湿润边缘整齐。
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3.做格兰染色显微镜下观察细菌形态
1.单个、多个或者短链状排列,最小。
2.最大,两个或者四个一起,四联或者短链状排列,疑似微球。
3、4号单个存在,比二号小,与一号大小接近。
一号
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二号
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三号
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四号
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根据细菌单个菌落和镜下形态确定为革兰阳性球菌。
1.2.3.4号菌做触媒实验,均为阳性。
1号菌根据肉眼和镜下形态怀疑为金黄色葡萄球菌,做血浆凝固酶实验验证
2号菌根据镜下形态和菌落,怀疑为微球菌,做呋喃唑酮实验验证
3.4号菌怀疑为表皮和腐生葡萄球菌,为区别二者需做新生霉素敏感试验


5号菌:完全色溶血,菌落周围有明显的完全透明环,环内红细胞全部溶解,单个菌落呈乳白色,大小0.5-2mm表面光滑湿润圆形,边缘整齐。
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6号菌:完全溶血菌,落周围有完全透明环,环内红细胞全部溶解,菌落透明白色,大小0.5-1mm表面光滑湿润,圆形,边缘整齐。
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7号菌:草绿色溶血,菌落周围有灰绿色的狭窄α-溶血圈,红细胞不完全溶解,菌落灰白色,大小0.5-1mm,表面光滑湿润边缘整齐。
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8号菌:无溶血,白色,大小0.5-1mm表面光滑湿润边缘整齐。
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3.做格兰染色显微镜下观察细菌形态
5号 革兰阳性 多个成串或者短链状排列,最小 医学微生物实验报告
6号 革兰阳性 单个或多个成短链状排列,比五号大
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7号 革兰阳性 双球菌 菌体呈矛头状,多成双排列,宽端相对,尖端相背
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8号 革兰阳性 菌体球形或卵圆形单个分散存在
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4.5678号菌做触媒实验,均为阴性
5.根据溶血情况和镜下形态观察决定
5号和6号做杆菌肽敏感试验和CAMP实验。
在两个血平板上,分别均匀涂布5,6号细菌,在血平板的中央贴上药敏纸片。置于37°温箱中24h培养。
在一个血平板上沿直径用接种环涂抹适量金黄色葡萄球菌,垂直于金葡划线方向接种5,6号菌。置于37°温箱中24h培养。
7号菌做optochin药敏试验
在一个血平板上,均匀涂布7号细菌,在血平板的中央贴上药敏纸片置于37°温箱中24h培养。
8号菌做胆汁七叶苷和高盐微量管实验,同时接种普通琼脂平板


六、实验结果
1号菌:金黄色葡萄球菌
触酶阳性 凝固酶阳性
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2号菌:微球菌
触酶阳性 呋喃唑酮敏感
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3号菌:表皮葡萄球菌
触酶阳性 新生霉素敏感
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凝固酶阴性

4号菌:腐生葡萄球菌
触酶阳性 新生霉素耐药
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凝固酶阴性






5号菌:A群
β溶血 杆菌肽敏感
医学微生物实验报告6号菌:B群
β溶血 杆菌肽耐药 CAMP阳性
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7号菌:肺炎链球菌
Optochin敏感
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8号菌:肠球菌
胆汁七叶苷阳性(黑色)和耐高盐 普通平皿长菌落
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